植物病原菌類及び有害昆虫の薬剤耐性の分子機構の解析と新薬剤設計への分子戦略の構築

植物病原真菌和害虫耐药性分子机制分析及新药设计分子策略开发

• 批准号: 07556013
• 负责人: 日比 忠明
• 金额: $ 11.01万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07556013/
• 关键词: 薬剤耐性; ベノミル剤耐性; 灰色かび病菌; 有機リン剤耐性; カンキツ緑かび病菌; コガタアカイエカ; ジカルボキシイミド剤耐性

1.カンキツ緑かび病菌のDMI剤耐性株は、シクロヘキシミド、アクリフラビン、4NQOなどDMI剤とは化学構造や作用機構のまったく異なる薬剤に対しても耐性を示したことから、多剤耐性であることが明らかになった。2.灰色かび病菌のジカルボキシイミド剤耐性株の培養ろ液中に存在する薬剤耐性誘発因子の精製を進めた結果、本因子が核酸関連物質である可能性が示されたので、各種の核酸関連物質について耐性誘発活性を検定したところ、cAMPのみにその活性が認められた。さらに、ELISAによって培養ろ液中にcAMPが存在することを確認するとともに、cAMPを除いた分画には耐性誘発活性が認められないことが明らかになったことから、薬剤耐性誘発因子の本体はcAMPもしくはそのアナログであることが強く示唆された。一方、本菌の多剤耐性遺伝子と推定される全長クローンについてその全塩基配列(4.5kb)を決定したところ、本遺伝子はP-glycoproteinをコードしており、そのプロモーター領域には酵母の多剤耐性制御因子結合配列(RDRE)と酷似した配列が存在していることが明らかになった。3.コガタアカイエカの有機リン剤耐性株由来のアセチルコリンエステラーゼ(AChE)cDNAをBmNPV/BmN4細胞系で発現させたところ、AChE活性は検出されたが、有機リン剤に対する耐性化は認められなかった。一方、耐性株と感受性株を交雑して阻害実験を行った結果、AChEに感受性をもたらす遺伝因子は劣性で、F1を耐性株で戻し交雑したB1では、両株が持つAChE非感受性/感受性の形質が等比で分離した。この遺伝因子はAChEコード領域には内在していないことから、キイロショウジョウバエで唯一実験的に証明されている有機りん剤耐性AChEの遺伝的機構とは異なる機構がコガタアカイエカに存在する可能性が示唆された。

1. カ ン キ ツ green か び germs の DMI tonic patience plant は, シ ク ロ ヘ キ シ ミ ド, ア ク リ フ ラ ビ ン, 4 nqo な ど DMI tonic と は chemical structure や effect institutions の ま っ た く different な る 薬 tonic に し seaborne て も patience を shown し た こ と か ら, tonic patience で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. 2. Grey か び germs の ジ カ ル ボ キ シ イ ミ ド tonic patience strains の に exists in cultivating ろ liquid す る 薬 tonic patience 発 factor の refined を lure into め た result, this factor が nucleic acid masato even material で あ が る possibility in さ れ た の で, various の nucleic acid masato even material に つ い て tolerance induced 発 active を 検 set し た と こ ろ, cAMP の み に そ が の activity recognition め ら れ た . さ ら に, ELISA に よ っ て に in cultivating ろ liquid cAMP が exist す る こ と を confirm す る と と も に, cAMP を except い た points draw に は patience 発 active が lure to recognize め ら れ な い こ と が Ming ら か に な っ た こ と か ら, 薬 tonic patience 発 lure factor の ontology は cAMP も し く は そ の ア ナ ロ グ で あ る こ と が く and shown strong sucking さ れ た. Traces of more than one party, the bacteria の tonic patience 伝 son と presumption さ れ る span ク ロ ー ン に つ い て そ の salt base full column (4.5 KB) を decided し た と こ ろ, this but 伝 は P - glycoprotein を コ ー ド し て お り, そ の プ ロ モ ー タ ー field に は yeast の tonic more patience suppression factor combined with column (RDRE) と resembles し た column Youdaoplaceholder0 exists て て る る とが とが Ming ら になった になった になった. 3. コ ガ タ ア カ イ エ カ の organic リ ン tonic patience plant origin の ア セ チ ル コ リ ン エ ス テ ラ ー ゼ (AChE) cDNA を BmNPV/BmN4 cell line で 発 now さ せ た と こ ろ, AChE activity は 検 out さ れ た が, organic リ ン tonic に す seaborne る patience the は recognize め ら れ な か っ た. Party, patience seedlings を と susceptibility in 雑 し て resistance against be 験 を line っ た results, AChE に susceptibility を も た ら す heritage 伝 factor は recessive で を patience, F1 plants で 戻 し pay 雑 し た B1 で は, struck strains が つ AChE sensitivity/susceptibility の character が geometric で separation し た. こ の heritage 伝 factor は AChE コ ー ド field に は inner し て い な い こ と か ら, キ イ ロ シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ で only be 験 に prove さ れ て い る organic り ん tonic patient AChE の but 伝 institutions と は different な る institutions が コ ガ タ ア カ イ エ カ に exist す が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

阿久津克己ら: "シクロスポリンAによる灰色かび病菌(Botrytis cinerea)の薬剤耐性克服" 茨城病虫研報. 37(印刷中). (1998)

Katsumi Akutsu 等人：“通过环孢菌素 A 克服灰葡萄孢的耐药性”，Ibaraki 害虫研究报告（1998 年）。

Kono,Y.et al.: "Acetylcholinesterase in insecticide resistant Culex tritaeniorhynchus:Characteristics accompanying insensitivity to inhibitor." Appl.Ent.Zool.32. 35-42 (1997)

Kono,Y.等人：“抗杀虫剂三带喙库蚊中的乙酰胆碱酯酶：伴随对抑制剂不敏感的特征。”

Akutsu,K.et al.: "In vitro production of the perfect stage by crossing with Japanese isolate of Botrytis cinerea" Ann.Phytopathol.Soc.Japan. 62. 372-378 (1996)

Akutsu,K.et al.：“通过与日本灰葡萄孢分离株杂交在体外生产完美阶段”Ann.Phytopathol.Soc.Japan。

阿久津克己: "植物病原菌類の薬剤耐性" New Food Industry. 37. 26-32 (1995)

阿久津胜美：“植物病原真菌的药物抗性”《新食品工业》37. 26-32 (1995)。

Kono,Y.et al.: "Possible Difference in the Structure of Acetylcholinesterase in Insecticide Susceptible and Resistant Strains of Culex tritaeniorhynchus Resulted from Structure- Activity Relationship of 3-Alkylsulfonylphenyl Methanesulfonates" Appl.Ent.Zo

Kono,Y.等人：“三带喙库蚊杀虫剂敏感菌株和抗药菌株乙酰胆碱酯酶结构可能存在差异，源于 3-烷基磺酰基苯基甲烷磺酸盐的结构-活性关系”Appl.Ent.Zo