無血清培養による臼歯歯胚の歯根形成、特に細胞分化・セメント質形成に関する研究

利用无血清培养研究磨牙牙胚根部形成，特别是细胞分化和牙骨质形成

• 批准号: 07771624
• 负责人: 藤原 尚樹
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771624/
• 关键词: 歯根形成; セメント質形成; 成長因子; 器官培養; 無血清培地

下顎骨と歯小嚢を伴う萠出直前の生後14日齢マウス下顎第一臼歯を摘出し、無血清BJGb培地で最大42日間の培養を行った。(1)培養液の検討:培養中の細胞合成活性の維持を目的に基本培地組成の改良を試みた。アスコルビン酸からL-アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩への変更、Linoleic Acid, Bovine Serum Albumin添加により良好な結果を得た。(2)培養下で歯根に形成されたセメント質様基質の検索:A)透過型電子顕微鏡;セメント質様基質に包埋された細胞の細胞内小器官の分布や発達状況、また細胞周囲に見られるコラーゲン線維の走行やmatrix vesicleの分布などの特徴はin vivoの有細胞セメント質に見られる構造と類似していた。B)免疫組織化学;in vivoではcollagen type I, IIIが歯根膜に存在するが、歯根象牙質・歯槽骨・セメント質はcollagen type IIIが欠如した。培養下で観察されたセメント質様基質やその周囲の構造にもこれと同様な反応が見られた。C) Electron Prove Micro Analysis;歯根象牙質と同様、セメント質様基質においてもリンとカルシウムのピークが確認された。しかしセメント質様基質のピークは象牙質のものより相対的に低く、石灰化の進行が未熟な状態であると推測された。(3)外因性因子の検討:石灰化促進因子としてNa-β-Glycerophsphate, Dexamethasone、成長因子としてEGF, TGF-β1を添加して培養した。各因子の添加においてもセメント質形成初期の特徴は観察されたが、石灰化の進行は未熟な状態に留まった。(4)分子生物学的手法による研究:RT-PCRに供するためin vivo, in vitroの各発達ステージの試料を収集中である。また効率良いRNA回収のための組織の粉砕法についても検討中である。

The mandible teeth were extracted at 14 days after birth, and the maximum number of days of culture was 42 in serum-free culture. (1)Study on culture medium: improving basic culture medium composition for maintaining cell synthesis activity in culture Good results were obtained from the addition of Linoleic Acid, Bovine Serum Albumin, etc. (2)A) Transmission electron microscopy; distribution and development of intracellular small organs embedded in the matrix; distribution and characteristics of the matrix vesicles in vivo; and in vivo structure and similarity of the matrix vesicles. B) Immunohistochemistry;in vivo, collagen type I, III and dentin are present in the dental root membrane, dentin and alveolar bone, and collagen type III is absent in the dental root membrane. In culture, we observe the structure of the substrate and the structure of the substrate. C) Electron Prove Micro Analysis; dentin identity, dentin matrix, dentin identity, dentin identity. In addition, it is speculated that the quality of the matrix is different from that of the dentin, and the lime is in progress. (3)Exogenous factors: calcification promoter Na-β-Glycerophate, Dexamethasone, growth factor EGF, TGF-β1 The addition of various factors has resulted in the observation of the initial characteristics of the material formation, and the progress of lime remains in an immature state. (4)Methods of molecular biology research:RT-PCR for in vivo, in vitro and various detection methods of sample collection The method of RNA recovery is very effective.