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ピロリン酸・リン酸代謝機構を標的としたセメント質形成機構の解明

针对焦磷酸盐/磷酸盐代谢机制阐明牙骨质形成机制

基本信息

批准号：
18791349
负责人：
佐藤淳
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

リン酸・ピロリン酸代謝機構に関わる遺伝子のうち、ピロリン酸を細胞内から細胞外へと輸送する膜タンパク質Ankylosis.protein(Ank)に異常を有しているために、細胞外のピロリン酸濃度が低下し、石灰化の抑制が出来なくなってしまうために、石灰化亢進となり、石灰沈着を伴った関節炎、骨の過成長、関節破壊が起こるank/ankマウスを用いて歯根膜細胞を採取し、ank遺伝子に異常を有するマウス歯根膜細胞株を樹立した。マウス実験動物から作成したHE染色標本での観察では、ahk野生型と異常型の歯根膜部の形態に明らかな組織学的違いは見出されなかった。しかしながら、セメント質部の比較ではank遺伝子異常型のマウスにセメント質の著明な肥厚が観察された。樹立した培養細胞株を、位相差顕微鏡を用いに観察したところ、ank遺伝子異常型マウスの歯根膜細胞は、骨芽細胞やセメント芽細胞に特徴的な立方状の形態を示していた。さらに、リアルタイムPCR法を用いて、骨基質タンパク質である骨シアロタンパク質とオステオカルシンの発現を検索したところ、ank遺伝子異常型歯根膜細胞は、ank野生型歯根膜細胞よりも非常に高い骨シアロタンパク質mRNAの発現を示していた。一方で、オステオカルシンmRNAは、ank野生型歯根膜細胞よりも低い発現を示していた。また、培養日数を7日目まで延ばして、別の骨基質タンパク質であるオステオポンチンの発現をリアルタイムPCR法にて検索したところ、培養1,3、5、7日目ともにank遺伝子異常型歯根膜細胞のオステオポンチンmRNAの発現がank遺伝子野生型歯根膜細胞よりも高く、ピロリン酸は石灰化の初期の段階からオステオポンチンのmRNA発現に影響していることが示された。

Ankylosis.protein(Ank) is abnormal in the intracellular and extracellular transport of acid, low extracellular acid concentration, inhibition of calcification, hypercalcification, calcification associated with arthritis, bone overgrowth, and inflammation. The root membrane cells were isolated from the root canal and the root canal cells were isolated from the root canal The morphology of the root membrane of the ahk wild-type and abnormal type was studied by HE staining. A comparison of the quality of the sample was made between the sample and the sample. The abnormal morphology of root membrane cells and bone bud cells was observed by phase contrast microscopy. In addition, the expression of bone matrix protein mRNA was detected by PCR in vitro and in vitro. The expression of bone matrix protein mRNA was also detected in vitro. The expression of mRNA in wild type dental root membrane cells was detected by PCR. 7 days after culture, different bone matrix proteins were detected by PCR, and 1, 3, 5, and 7 days after culture. The early stages of liming are influenced by the expression of mRNA.