クローン歯根膜培養細胞のIL-6産生能の検討

克隆牙周膜培养细胞产生IL-6能力的检测

• 批准号: 07771984
• 负责人: 小倉 直美
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771984/
• 关键词: ヒト歯根膜細胞; clonal cell; interleukin-6; lipopolysaccharide; Campylobacter rectus

Interlleukin-6(IL-6)はmulti-functional cytokineとして、炎症や免疫応答において重要な役割を担っている。また、培養骨髄細胞にIL-6を作用させると破骨細胞の形成促進が報告されたことから、骨吸収因子としても注目されている。一方、歯根膜は歯牙と歯槽骨の間に存在し、歯牙の維持に重要である。歯根膜はheterogenousな細胞で構成されているといわれており、表現型の異なる亜群が混在すると考えられている。本申請では、ヒト歯根膜由来細胞からclonalな細胞を樹立し、口腔内病原性細菌として注目されているCampylobacter rectus(C. r. )のLPSを作用させ、IL-6 産生量に差があるかを検討した。〈方法〉健全な第1小臼歯から歯根膜を採取し、out growth法にて初代培養を行った。得られた歯根膜細胞を1 wellあたり0.5cellとなるように384well plate2枚に蒔き、1 wellあたり1個の細胞を増殖、継代培養を行った。増殖したclonal歯根膜細胞を24well plateに蒔き、confluence後C. r. LPS 5μg/mlを24時間作用させ、clonal歯根膜細胞の培養上清中のIL-6量をHYCYTE社製HUMAN IL-6 ELISA kitを用いて測定した。〈結果及び考察〉768wellのうち、15wellについて細胞の増殖が認められた。これらclonal細胞は線維芽細胞様、骨芽細胞様細胞の形態を示した。15cloneのうち実験可能なまで増殖したものは4 cloneで、いずれも線維芽細胞様であった。4 cloneのIL-6産生量は、LPSを作用させない系では1.1-1.5μg/10^6cellsと少量のIL-6を産生していた。LPSを作用させた系では2.9、3.2、6.2、15.9μg/10_6cellsで、LPS刺激によるIL-6産生量の上昇には4 clone間で差があることが認められた。以上の結果から、歯根膜由来細胞はLPS刺激によるIL-6産生上昇に違いがある細胞が存在することが判明した。しかしclone化した細胞は増殖能の低下が著しく、今後、多彩な実験を行うためにはSV40等による形質転換を行い、増殖能を高めることが必要であると考えている。

Interlleukin-6 (IL-6), multi-functional cytokine infection, inflammation, immunity, immunity, inflammation, immunity, The formation of IL-6 cells promotes the formation of bone resorption factors, bone resorption factors and bone resorption factors. On the other hand, the root membrane has a significant effect on the alveolar bone, and the tooth maintains an important bone. The root membrane, heterogenous, cell, cell and cell. In this application, the origin of the root membrane of clonal, the presence of pathogenic bacteria in the oral cavity, the effect of Campylobacter rectus (C. r.) on LPS, and the production of IL-6 were studied. < methods > the first acetabulum, root membrane, out growth method and primary culture method were perfected. We obtained 1 well cell, 1 well cell culture, 1 well cell culture, and 1 cell culture. C. r. LPS 5 μ g