DNAをターゲットとする、海洋無脊椎動物由来の新規抗癌・抗菌物質の研究

来自海洋无脊椎动物的针对 DNA 的新型抗癌和抗菌物质的研究

• 批准号: 07772187
• 负责人: 飯島 亮介
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772187/
• 关键词: タツナミガイ; 無脊椎動物; 海洋生物; 生体防御; 抗癌物質; 抗菌物質

本研究の目的は海洋無脊椎動物タツナミガイの卵白腺に新たに見いだした、DNA切断作用を有する抗腫瘍・抗真菌活性の精製と構造解析、作用機構の解明である。よってまず活性物質の精製を試みた。活性物質は直接の細胞毒性以外に、in vitroでプラスミドDNA切断作用を示すので、これを指標に以下の精製方法の検討を行った。まず材料のタツナミガイ卵白腺をリン酸バッファーとホモジナイズ、遠心し、上清に活性を得た。続いて硫酸アンモニウムを用いた段階的な塩析によって活性を50%から100%沈殿画分に回収した。予備検討で活性を吸着画分として回収できることが見込まれていたクロマトグラフィーのうち、MONO-Qカラム及びハイドロキシアパタイトカラムをHPLCシステムに接続して分画を行った。MONO-Qカラムでは0.5から1モルNaClで活性が溶出し、ハイドロキシアパタイトカラムではリン酸濃度400から500ミリモルで溶出した。上記の精製ステップを経ることにより、活性物質は卵白腺中の主要な抗腫瘍蛋白質ドラベラニンAと分離された。また比活性は、粗抽出画分100μg/ml程度であったが、数μg/mlまで上昇した。SDSポリアクリルアミド電気泳動では分子量100000以上の領域にいくつかのバンドがみられ、低分子のものは含まないことが観察された。次のステップとしてゲル濾過及びMONO-Sカラムクロマトグラフィーの検討を行っているところであり、精製完了次第N末端アミノ酸配列解析、cDNAクローニングと作用機構解析を行う。

Purpose this study の は Marine invertebrates タ ツ ナ ミ ガ イ の albumen gland に new た に see い だ し た, DNA cutting off を have す る resistance swollen sores, antifungal activity の refined と structure, role institutions の interpret で あ る. Youdaoplaceholder0 active substance よってまず refining を test みた. Active substances は の directly outside に, in vitro cytotoxicity で プ ラ ス ミ ド を DNA to cut off the role す の で, こ れ を index に の refining method under の 検 line for を っ た. ま ず material の タ ツ ナ ミ ガ イ albumen gland を リ ン acid バ ッ フ ァ ー と ホ モ ジ ナ イ ズ, far し, supernatant に active を た. 続 い て sulfate ア ン モ ニ ウ ム を with い た Duan Jie な of salt analysis に よ っ て 50% active を か ら に Shen Dian draw points back to 100% 収 し た. Beg で active reserve 検 を sorption draw points と し て back 収 で き る こ と が see 込 ま れ て い た ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー の う ち, MONO - Q カ ラ ム and び ハ イ ド ロ キ シ ア パ タ イ ト カ ラ ム を HPLC シ ス テ ム に meet 続 し painting line を っ て points た. MONO - Q カ ラ ム で は 0.5 か ら 1 モ ル NaCl で が stripping し, active ハ イ ド ロ キ シ ア パ タ イ ト カ ラ ム で は リ ン acid concentration 400 か ら 500 ミ リ モ ル で dissolution し た. Written の refined ス テ ッ プ を 経 る こ と に よ り, active substances は albumen gland の mainly な resistance swollen sores protein ド ラ ベ ラ ニ ン A と separation さ れ た. The また activity また, the degree of rough extraction fraction of 100μg/ml であったが, and the number of μg/mlまで increased by <s:1> た. SDS ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド electric 気 swimming で は molecular weight more than 100000 の field に い く つ か の バ ン ド が み ら れ, low molecular の も の は containing ま な い こ と が 観 examine さ れ た. Time の ス テ ッ プ と し て ゲ ル filtration and び MONO - S カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー の 検 line for を っ て い る と こ ろ で あ り, refined over time N terminal ア ミ ノ acid column analysis, cDNA ク ロ ー ニ ン グ と line analytical を う role institutions.