ロイコトリエン産生調節に関わるHPETEペルオキシダーゼの遺伝生化学的解析

参与白三烯产生调节的 HPETE 过氧化物酶的遗传和生化分析

• 批准号: 07772179
• 负责人: 今井 浩孝
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772179/
• 关键词: リポキシゲナーゼ; HPETE; リン脂質ヒドロペルオキシドグルタチオンペルオキシダーゼ; クローニング; 発現; LTB_4; HETE

私はロイコトリエン産生調節に関わるHPETEの代謝機構の解明を明らかにするために、ラット好塩基球系癌細胞(RBL-2H3、RBL-1)を用いて研究を行い、本年度において以下の知見を明らかにした。1、化学発光HPLCによる5-HPETEの定量系を利用して、RBL-2H3細胞における5-HPETEの代謝について検討した。その結果、RBL-1細胞と動揺にグルタチオンの枯渇剤であるジエチルマレイミドの処理により酸化ストレスをかけた後、アラキドン酸添加による刺激により細胞内の5-HPETEの蓄積がみられた。またこの時、リポキシゲナーゼの代謝物(LTB4、5-HETE)の総量が顕著に増加することが明らかとなった。このことからグルタチオンペルオキシダーゼがロイコトリエン産生調節に大きく寄与していることが明らかとなった。2、HPETEペルオキシダーゼの候補の一つであるリン脂質ヒドロペルオキシドグルタチオンペルオキシダーゼ(PHGPx)の遺伝子のクローニングに成功した。本蛋白質は終止コドンでコードされた特殊アミノ酸であるセレノシステインを含んでいる。これまで細胞内での本遺伝子の発現に成功した報告はなかったが、今回サル腎臓細胞由来COS-7を用い、一過性発現を試みたところ3′側非翻訳領域を含む遺伝子の導入により、PHGPx蛋白質、活性発現の上昇に成功した。3′側非翻訳領域を欠損した翻訳領域のみの遺伝子では発現は見られなかった。このことから本遺伝子の活性発現には3′側非翻訳領域が必要であることを明らかにした。(参考論文参照)3、HPETEペルオキシダーゼの候補の一つであるPHGPxのリポキシゲナーゼ活性に対する影響を調べる目的で、COS細胞で発現に成功した遺伝子をRBL-2H3細胞にエレクトロポレーション法を用いて遺伝子導入し、PHGPxの高発現株の作製を試み、現在4株の高発現株の樹立に成功した。

The understanding of the metabolic mechanism of HPETE related to the regulation of cell proliferation is being studied in the context of the use of human basoid cancer cells (RBL-2H3, RBL-1). 1. The quantitative analysis of 5-HPETE by HPLC and the metabolic analysis of 5-HPETE in RBL-2H3 cells were investigated. As a result, 5-HPETE accumulation in RBL-1 cells was stimulated by acid addition after treatment. The total amount of the metabolites (LTB4, 5-HETE) increased significantly. This is the first time I've ever seen a woman. 2. HPETE selects the right candidate for the right candidate (PHGPx). The protein contains the following special amino acids: The successful expression of this protein in the cell was reported. However, the expression of COS-7 in kidney cells was successfully increased. There is no loss in the 3′-side non-reverse field, but the hidden legacy of the reverse field is now emerging. The activity of this gene appears in the 3′ side of the non-inverted field. (Refer to paper)3. HPETE selection and selection of candidates for PHGPx were successfully performed in COS cells for the purpose of regulating the activity of PHGPx, and four highly developed strains of PHGPx were successfully established in RBL-2H3 cells.

项目成果

Hirotaka Imai et al.: "Molecular Cloning and Fanctional Expression of a cDNA for Rat Phospholipid Hydroperoxide Glutathione Peroxidase 13L Untranslated Region of the Gene Is hecessary for Functional Expression" J. Biochemistry. 118. 1061-1067 (1995)

Hirotaka Imai 等人：“大鼠磷脂氢过氧化物谷胱甘肽过氧化物酶 13L 基因非翻译区的 cDNA 的分子克隆和功能表达对于功能表达来说是必需的”J. Biochemistry。