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相同的な制御タンパク質のホスホリボシルピロリン酸合成酵素への特異が結合

同源调节蛋白与磷酸核糖焦磷酸合酶的特异性结合

基本信息

批准号：
07780529
负责人：
石嶌純男
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット肝ホスホリボシルピロリン酸合成酵素は、2種の触媒サブユニットとさらにそれと相同性のある39kDa制御タンパク質(PAP39)を含む分子量100万程度の大きな多量体(計算上34mer)として存在する。本研究では 1.大腸菌で発現させ精製した触媒サブユニットの多量体を1MMgC1_2処理により解離させたのちグルタチオン-S-トランスフェラーゼ-PAP39の融合タンパク質と混合し、グルタチオン-Sepharoseを加え遠心して融合タンパク質をゲルとともに沈殿させ、このとき結合している触媒サブユニットの量を測定した。その結果、2種の触媒サブユニットはいずれも単独でPAP39と結合し、その結合にちがいはみられなかった。2.触媒サブユニットとPAP39 cDNAをそれぞれ共存可能なベクターに組み込み、同時に大腸菌に取り込ませた。可溶性画部分より精製した標品では、触媒サブユニットとPAP39とが高分子量の複合体を形成し、複合体を安定して得る方法が確立できた。複合体中の触媒サブユニットとPAP39との比は簡単な整数比ではなく、しかも発現ベクターのコピー数、すなわち遺伝子量に応じて変動した。触媒サブユニット当たりの比活性は、PAP39を約40%含む複合体で50%以下に低下し、PAP39のみで活性抑制作用をもつことが証明された。3.上記複合体を、可視領域に吸収をもつ架橋試薬ビス(4-フルオロ-3-ニトロフェニル)スルホンで修飾したところ分子量の大きな架橋産物が得られた。しかしその収量が低いため、現在架橋領域を含むペプチド断片を得るまでにはいたっていない。このペプチド断片の調整とそのアミノ酸配列決定が今後に残された課題である。

There is a high molecular weight complex (PAP39) containing a molecular weight of 1 million (calculated with 34mer) in the presence of high molecular weight (calculated by 34mer). The purpose of this study is to study 1. The fungus shows the essence, the catalyst, the catalyst, the 1MMgC1_2, the separation, the isolation, the fusion, the fusion. In combination with the catalyst, the catalyst was used to measure the temperature. The results of the test, the combination of the two kinds of catalysts, the results of the results, the results of the results, the results and the results. two。 The co-existence of the catalyst and the PAP39 cDNA filter may cause the co-existence of the catalyst and the concomitant bacteriophage. In the soluble painting part, the method is to confirm the formation of the complex of high molecular weight, the formation of the complex of high molecular weight, the method of diazepam and the method of confirming the formation of the complex. In the complex, the number of copies of the catalyst, the number of PAP39, the number of copies, the number of copies, the number of data, the number of data, the number of copies, the number of copies. The specific activity of the catalyst, the specific activity of the catalyst, the specific activity of the PAP39, the complex, the activity inhibition of PAP39, the specific activity of the complex, the specific activity of the catalyst, the specific activity, the specific activity and the activity inhibition of the complex were determined. 3. The picture above shows that there is a high molecular weight in the field of view, which can be used to measure the molecular weight of the material. The quantity is very low, and there are many fragments in the existing field. In order to make a decision on the allocation of acid, we will make a decision on how to solve the problem in the future.