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緑色植物の遊泳細胞にみられるスプライン多層構造体の細胞生物学的研究

绿色植物游泳细胞中样条多层结构的细胞生物学研究

基本信息

批准号：
07740633
负责人：
宮村新一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07740633/
关键词：
シダ植物精子鞭毛装置スプライン・多層構造体

项目摘要

緑色植物のなかで車軸藻綱、コケ植物、シダ植物、裸子植物のソテツ、イチョウなどの陸上植物へと連なる進化系列の植物の遊泳細胞はスプライン・多層構造体型の鞭毛装置をもっている。スプライン・多層構造体を構成するタンパク質の組成を調べるために、シダ植物カニクサLygodium japonicum の精子からのスプライン・多層構造体の単離条件の検討を行った。カニクサの造精器を多数形成する突然変異株 an-1株に蒸留水を加えて精子を放出されたのち、遠心で沈殿として回収した。沈殿を10mMTris緩衝液に懸濁し、100,6020μmのナイロンメッシュで濾過し、精子を精製した。精子を50mM酢酸ナトリウムに懸濁し氷上で10分処理することで鞭毛を除去した。次いで、1.5%TritonX-100処理で細胞膜を溶解し、500units/ml DNase l処理で細胞核を分解し、スプライン・多層構造体の粗分画を得た。最後に、パーコール連続密度勾配遠心でスプライン・多層構造体を精製した。精製したスプライン・多層構造体を電子顕微鏡で観察したところスプラインに上には基底小体が並びその周りを電子密度の高い物質がとりまいていた。また、基底小体とスプラインを構成する微小管をつなぐ構造が存在することが新たに分かった。多層構造体はin vivo と同じ形態を保っており、その上には電子密度の高い物質とアクセサリー微小管が存在していた。従って、単離されたスプライン・多層構造体はin vivo の状態を保っていると考えられる。スプライン・多層構造体のタンパク質組成を調べるためにSDS-PAGE を行ったところα-,β-チューブリンを含めて少なくとも40以上のタンパク質のバンドが検出された。現在、スプライン・多層構造体の特異タンパク質を精製されたスプライン・多層構造体を用いてモノクローナル抗体を作製しているところである。

The swimming cells of plants of the evolutionary series of green plants, such as Axophyta, Urophyta, Naked plants, etc. A study of the composition of multilayer structures and the conditions for the separation of Lygodium japonicum from plants. The sperm cells were formed in a large number of plants, and the sperm cells were released in a large number of plants. 10 mM Tris buffer suspension, 100, 6020 μm filtration, sperm purification Sperm cells were suspended in 50mM acetic acid for 10 minutes and flagella were removed. Then, 1.5% Triton X-100 treatment resulted in cell membrane lysis, 500units/ml DNase 1 treatment resulted in cell nucleus decomposition, cell membrane lysis, and rough drawing of multilayer structure. Finally, the density matching of the multi-layer structure is refined. Multilayer structures are observed by electron microscopy, and the electron density of the substrate is high. The structure of the microtube is composed of the basal body and the new structure. Multilayer structures are in vivo and in the same shape, and high electron density substances and microtubes exist. The multilayer structure is maintained in vivo. SDS-PAGE was used to determine the composition of the multilayer structure, including α-,β-, and more than 40 samples. The present invention relates to the preparation of multilayer structure with specific antibody.