燐酸化による電位依存性K^+チャネルの機能修飾の点変異導入法による解析

使用点突变方法分析磷酸化电压门控 K^+ 通道的功能修饰

• 批准号: 07740647
• 负责人: 古川 康雄
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07740647/
• 关键词: K^+チャネル; 不活性化; アフリカツメガエル卵母細胞

本研究は、軟体動物アメフラシの中枢神経系においてクローニングされたK^+チャネル(AKvl. 1a)を用いて、電位依存性K^+チャネルの不活性化機構においてみられる燐酸化による機能修飾を、分子レベルで明らかにすることを目的とした研究の一環として行ったものである。アフリカツメガエル卵母細胞をチャネルの発現系として用いることで、プロテインキナーゼC(PKC)活性化剤によりAKvl. 1aのアミノ末端依存性不活性化機構が機能修飾されることを明らかにしており、またいくつかの燐酸化変異体の作製も行っているので(Furukawa et al. 1995)、本研究では、まずAKvl. 1aの機能を、無細胞系でのチャネル電流記録を含むパッチクランプ法により更に詳細に解析することを進めた。その結果、AKvl. 1aの不活性化機構において、以下のような新たな知見が得られた。AKvl. 1aの不活性化からの回復過程は、生理的な条件下(外液低K^+濃度、活動電位に相当する短い脱分極)ではきわめて遅く、1Hz以下の低頻度の繰り返し脱分極パルスによっても、容易に不活性化状態のチャネルが蓄積するために活性化しうるチャネル数が激減する。この現象は、細胞外のK^+濃度に依存しており、その濃度が高まると、不活性化からの回復が速まり、より高頻度の繰り返しパルスを与える事が可能になる。この性質はアミノ末端欠失変異体ではみられないので、AKvl. 1aが示すアミノ末端依存性不活性化機構の性質を示すものである。これらの成果は、J. Neurophysiology誌に発表した。現在、この機構とPKCによる機能修復の接点を解析するために、PCR法をもちいた新たな変異体の作製を含む研究を継続している。

This study is aimed to investigate the central nervous system of molluscs in the context of the development of K^+ cells. 1a) The mechanism of inactivation of K^++-dependent protein production in the middle of the reaction, phosphorylation in the middle of the reaction, functional modification in the reaction, and molecular modification in the reaction. The development system of oocyte development in vitro was developed by using the activation agent AKvl. 1a. End-dependent inactivation mechanisms for functional modification of phosphorylated alloenzymes (Furukawa et al. 1995). The function of 1a is to record the current without cell line, including the method of analysis. AKvl. 1a Inactivation of the mechanism, the following new knowledge to see AKvl. The recovery process of 1a inactivation is under physiological conditions (low K^+ concentration in external solution, short depolarization corresponding to active potential). The frequency of inactivation is low below 1 Hz, and the number of inactivation is easy to accumulate. This phenomenon is dependent on extracellular K^+ concentration, high K^+ concentration, rapid inactivation, high K ^+ frequency, and high K ^+ concentration. The nature of this property is to be lost at the end of the line, AKvl. 1a shows the nature of end-dependent deactivation mechanisms. The results of this study were published in J. Neurophysiology. Now, the mechanism of PKC and functional repair of the joint analysis, PCR and other new methods of operation, including research

项目成果

Yasuo Furukawa: "Accumulation of Inactivation in a cloned transient K^+ channel (AKvl. 1a)of Aplysia" Journal of Neurophysiology. 74. 1248-1257 (1995)

Yasuo Furukawa：“海兔的克隆瞬时K^通道（AKvl.1a）失活的累积”神经生理学杂志。