K^+チャネルにおけるプロティンキナーゼCによる機能修飾の分子機構

蛋白激酶C对K^+通道功能修饰的分子机制

• 批准号: 06740630
• 负责人: 古川 康雄
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06740630/
• 关键词: K^+チャネル; プロテインキナーゼC; アフリカツメガエル卵母細胞

本研究は、軟体動物アメフラシの中枢神経系においてクローニングされたK^+チャネル(AK01a)を用いて、プロテインキナーゼC(PKC)の活性化剤によるK^+チャネル機能の修飾を分子レベルで明かにすることを目的として行った。アフリカツメガエル卵母細胞をチャネルの発現系として用いることで、PKC活性化剤によるAK01aの機能修飾が、AK01a自体の燐酸化によるのか、細胞内に存在する他のチャネル機能を調節するような蛋白の燐酸化によって間接的にもたらされているのかを明かにする事を大きな目標として研究を実施し、以下のような成果を得た。AK01a及び分子生物学的手法で作成したAK01aの燐酸化変異体を用いて、in vitroでcRNAを合成し、cRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に注入・培養することでチャネルを発現させた。チャネル発現の検定、発現したチャネルの基本的な性質、及びPKC活性化剤による修飾の解析を、二本の微小電極を使用する膜電位固定法で解析した。その結果、AK01aの一次構造上で、PKC活性化剤による機能修飾において重要となる領域やアミノ酸をある程度明らかにすることが出来た。その成果の一部は、日本動物学会が発行している国際誌であるZoological Scienceに投稿し、現在印刷中である。その成果をふまえて、より詳細な分子機構の解明を進めるために、卵母細胞におけるパッチクランプ法を用いた機能解析を現在行っており、まだ発表できる段階ではないが興味深い成果が得られている。

The purpose of this study was to modify the function of K ^+ cell in the central nervous system of molluscs by using AK01a as an activating agent for C(PKC). The development of oocytes in vitro is related to PKC activation, functional modification of AK01a, phosphorylation of AK01a itself, intracellular regulation of other oocyte functions, phosphorylation of protein, indirect regulation of oocyte development, and the following results. AK01a and molecular biology methods to create AK01a phosphorylation variant, in vitro, cRNA synthesis, cRNA injection, culture, and development The detection and detection of protein production, the basic properties of protein production, and the analysis of modification of PKC activation agents, and the use of membrane potential fixation method for analysis of protein production As a result, AK01a has a primary structure, PKC activation agent, functional modification, and domain modification. The Zoological Society of Japan has been published in the International Journal of Zoological Science and is currently in print. The results of the study are now being developed, the understanding of the detailed molecular structure is advancing, the functional analysis of oocytes is being carried out using the CCKRANP method, and the results are being developed at various stages.

项目成果

Yasuo Furukawa: "Up- and Down-Modulation of a Cloned Aplysia K^+ Channel (AKv1.1a) by the Activators of Protein Kinase C" Zoological Science. (印刷中).

Yasuo Furukawa：“蛋白激酶 C 激活剂对克隆海兔 K^+ 通道 (AKv1.1a) 的上调和下调”动物学科学（正在出版）。