解糖系振動波形変化に基づく環境中毒性物質のバイオセンシング

基于糖酵解振动波形变化的环境有毒物质的生物传感

• 批准号: 07750902
• 负责人: 鈴木 正康
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyushu Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07750902/
• 关键词: 解糖系振動; バイオセンシング; バイオアッセイ; 毒性; 酵母

本研究では酵母抽出液を用いて化学物質の添加に伴う解糖系振動の波形の変化を測定し、振動周期、振幅などの指標をもとに定量化することにより毒性センシング法としての可能性を検討した。まず、安定した振動が得られる諸条件を検討した。自動乳鉢で30分間粉砕した乾燥酵母(Saccharomyces cerevisiae)0.6gを0.2Mリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)3.0mlに加え、室温で1時間撹拌した。この懸濁液を9000g,15分間遠心分離したのち、その上清0.6mlに1.0Mトレハロース溶液0.2mlを添加し、NADH濃度の変化を340nmでの吸光により測定した。測定温度は25℃に設定した。この条件下で周期約10分の振動が4時間以上持続した。そこで次に振動が見られている酵母抽出液に、呼吸活性阻害剤、解糖系酵素活性化剤および阻害剤、界面活性剤、重金属、アセトアルデヒド等を添加した。まず溶液添加に伴う外乱の影響を調べるために振動が見られている系に脱イオン水や緩衝液を注入して振動波形の変化を調べたところ影響は無視できる程度であった。そこで次に化学物質を脱イオン水または緩衝液に溶かしたものを10μl添加し、振動波形の変化を測定した。その結果物質添加に伴う振動波形変化は各化学物質の酵素に対する作用の違いを反映し、それぞれ特徴的な変化を示した。また2種類の化学物質を同時に添加した場合、物質の種類によって相加的あるいは相乗的な影響が波形変化に現れた。最後に本法の振動の再現性を高めると共に、本測定系の試薬化を目的として、凍結乾燥した酵母抽出液により同様の測定を行った。その結果、振動は乾燥を行っていない抽出液同様に誘発され、化学物質の測定も可能であった。凍結乾燥標品は4週間以上の保存が可能であることがわかった。

In this study, the yeast extract liquid was added with chemical substances and the waveform of the glycolytic system vibration was changed, and the vibration cycle was measured. Period, amplitude index and quantitative quantification of toxicity and toxicity.まず、Stable vibration がget られるAll conditions を検question した. Automatic mortar for 30 minutes, dry yeast (Saccharomyces cerevisiae) 0.6g, 0.2M acidic acid buffer (pH7.0) 3.0ml, add it, stir it at room temperature for 1 hour.この suspension liquid を9000g, 15 minutes of centrifugal separation したのち, その supernatant 0.6ml に1.0M トレハ0.2ml of the ロース solution was added, and the NADH concentration was changed to 340nm and the absorbance was measured. The measurement temperature is set at 25°C. Under such conditions, vibrations with a period of about 10 minutes should be maintained for more than 4 hours. Yeast extract, respiratory activity inhibitor, glycolytic enzyme activity Chemical inhibitors, surfactants, heavy metals, acetaminophen, etc. are added. The addition of まず solution is accompanied by the influence of external disturbances and the vibration of the べるためにが见られているsystem に出イオン水The buffer is injected and the vibration waveform is changed and the influence is adjusted regardless of the degree of the vibration waveform. The chemical substance was dissolved in water and the buffer solution was dissolved in 10 μl, and the vibration waveform was changed and measured. The result of the addition of substances is the change of the vibration waveform, the action of enzymes of each chemical substance, the reflection of the enzyme, and the special change of the chemical substance. When two types of chemical substances are added at the same time, the effect of the addition of the two types of chemical substances and the multiplication of the multiplication of the two types of chemical substances is reflected in the waveform change. Finally, the reproducibility of the vibration of this method is high, the purpose of the assay system is the test, and the freeze-drying of the yeast extract is the same as the determination of the method. The result of the test, vibration and drying, the extraction of the liquid, and the measurement of chemical substances are possible. It is possible to store freeze-dried standard products for more than 4 weeks.

项目成果

I.Karube et al.: "Microbial toxin sensor system using bioluminescence" DENKI KAGAKU. 63. 1134-1137 (1995)

I.Karube 等人：“利用生物发光的微生物毒素传感器系统”DENKI KAGAKU。