キュウリ篩管汁液特異的リポキシゲナーゼ分泌機構の解明 〜その生物工学への利用を目指して〜

阐明黄瓜韧皮部汁特异性脂氧合酶分泌机制 - 旨在将其用于生物工程 -

• 批准号: 07760088
• 负责人: 松井 健二
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760088/
• 关键词: リポキシゲナーゼ; キュウリ; 篩管; cDNA

リポキシゲナーゼ(LOX)はリノール酸やリノレン酸などの不飽和脂肪酸に酸素添加し、脂肪酸ヒドロペルオキシドを生成する酵素である。本酵素は植物一般に広く存在するが、本酵素の生理的役割についての明確な回答はまだ得られていない。LOXは様々な組織に様々なアイソザイムが存在し、その各々が異なった生理的役割を担っているものと考えられている。その中でも興味深いことに、キュウリ篩管汁液に含まれる蛋白質のうちほぼ90%までもがLOXで占められている。本研究では、(1)篩管特異的LOXがどのような機構で局在するのか、(2)LOXが篩管に存在する生理的な意味は何か、を解明することを目的とした。この目的のため、篩管特異的LOXを精製し、その性質を明らかにすると共に、そのcDNAクローニングを試みた。篩管汁液は発芽2カ月のキュウリ葉柄から採集した。このものを透析後、HPLCにて分離、精製した。その結果、篩管汁液LOXは等電点が異なるが、サブユニットサイズが同じ約93kDのふたつのアイソフォームからなることが解った。そのうち、主要なアイソフォーム(peLOX1)の至適pHは5-6で、そのpH-活性カーブはキュウリ根特異的LOXのそれと酷似していた。精製したpeLOXの内部配列を自動エドマン分解により決定したところNH3-YAMELLLNLYGXG-COOHであった。この配列はこれまでキュウリより単離されたcotLOX、rootLOXのどちらとも60%程度の相同性しかなく、新たなアイソザイムであることが明らかとなった。現在、この部分アミノ酸配列を元にデジェネレイトプライマーを作製し、キュウリ茎mRNAからRT-PCRにより、peLOX cDNAのクローニングを進めており、これまでに部分長cDNAを得た。また、平行してキュウリゲノムライブラリーからこれまでに数種のLOX遺伝子を単離しており、peLOXの篩管特異的発現を制御しているであろう遺伝子プロモーター領域の検索、組み換え技術を用いたプロモーターアッセイを精力的に進めている。これらの成果については現在投稿準備中である。

The production of enzymes was caused by the addition of fatty acids, the addition of fatty acids, the production of enzymes, and the addition of fatty acids. (LOX) This enzyme generally exists in plants, and the physiological function of this enzyme can be clearly answered. In the LOX system, the organization is responsible for the existence of health care systems, and the physiology of the workers is very important. There is a deep taste in the juice of the tube, which contains protein, protein, LOX, protein, and so on. In this study, (1) the management of the special LOX information system, (2) the existence of physiological implications in the management of LOX drugs, and the understanding of the purpose of this study. The purpose of this study is to determine the quality of the LOX, the quality of the device, the accuracy of the information, and the accuracy of the cDNA test. Tube sap, bud, month, month and month. After dialysis, HPLC was separated and refined. The result of the test, the LOX of the tube juice, and so on, the results of the test, the results of the test, the results of the results, the tube juice LOX and so on, the results of the results, the tube juice and other electrical properties, such as the results of the results, the tube juice and other electrical properties. From peLOX1 to pH 5-6, pH-activity is similar to LOX, which is specific to the root. There is an internal configuration of the automatic peLOX system, and the automatic communication system decomposes the decision to determine the location of the NH3-YAMELLLNLYGXG-COOH engine. This is not true. This is not true. CotLOX, rootLOX, rootLOX, homology, similarity, similarity At present, some of the raw materials are used to improve the quality of the system, the mRNA is used to improve the quality of the RT-PCR, the peLOX cDNA is used to improve the quality of the system, and the cDNA is improved in the first part. A number of LOX devices have been used to monitor the performance of the system, and the peLOX system has been used to improve the performance in the field of technology and technology. The results are now in preparation for submission.