キュウリ篩管汁液特異的リポキシゲナーゼ分泌機構の解明 〜その生物工学への利用を目指して〜

阐明黄瓜韧皮部汁特异性脂氧合酶分泌机制 - 旨在将其用于生物工程 -

• 批准号: 07760088
• 负责人: 松井 健二
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760088/
• 关键词: リポキシゲナーゼ; キュウリ; 篩管; cDNA

リポキシゲナーゼ(LOX)はリノール酸やリノレン酸などの不飽和脂肪酸に酸素添加し、脂肪酸ヒドロペルオキシドを生成する酵素である。本酵素は植物一般に広く存在するが、本酵素の生理的役割についての明確な回答はまだ得られていない。LOXは様々な組織に様々なアイソザイムが存在し、その各々が異なった生理的役割を担っているものと考えられている。その中でも興味深いことに、キュウリ篩管汁液に含まれる蛋白質のうちほぼ90%までもがLOXで占められている。本研究では、(1)篩管特異的LOXがどのような機構で局在するのか、(2)LOXが篩管に存在する生理的な意味は何か、を解明することを目的とした。この目的のため、篩管特異的LOXを精製し、その性質を明らかにすると共に、そのcDNAクローニングを試みた。篩管汁液は発芽2カ月のキュウリ葉柄から採集した。このものを透析後、HPLCにて分離、精製した。その結果、篩管汁液LOXは等電点が異なるが、サブユニットサイズが同じ約93kDのふたつのアイソフォームからなることが解った。そのうち、主要なアイソフォーム(peLOX1)の至適pHは5-6で、そのpH-活性カーブはキュウリ根特異的LOXのそれと酷似していた。精製したpeLOXの内部配列を自動エドマン分解により決定したところNH3-YAMELLLNLYGXG-COOHであった。この配列はこれまでキュウリより単離されたcotLOX、rootLOXのどちらとも60%程度の相同性しかなく、新たなアイソザイムであることが明らかとなった。現在、この部分アミノ酸配列を元にデジェネレイトプライマーを作製し、キュウリ茎mRNAからRT-PCRにより、peLOX cDNAのクローニングを進めており、これまでに部分長cDNAを得た。また、平行してキュウリゲノムライブラリーからこれまでに数種のLOX遺伝子を単離しており、peLOXの篩管特異的発現を制御しているであろう遺伝子プロモーター領域の検索、組み換え技術を用いたプロモーターアッセイを精力的に進めている。これらの成果については現在投稿準備中である。

LOX is an enzyme that produces fatty acids, unsaturated fatty acids, and fatty acid derivatives. The enzyme is generally present in plants, and its physiological activity is clearly defined. LOX is the most important part of the organization. It is the most important part of the organization. The protein content in the sap is 90%. The purpose of this study is to: (1) clarify the physiological implications of the existence of LOX in sieve tubes; and (2) clarify the mechanism of LOX in sieve tubes. The purpose of this study is to refine and characterize LOX, and to test its cDNA. The sap of the sieve tube is collected in the second month. After dialysis, HPLC separation and purification. As a result, LOX isoelectric points of sieve tube sap are different, and the isoelectric points of sieve tube sap are different. The isoelectric points of sieve tube sap are about 93kD. The most suitable pH for LOX 1 is 5-6, and the pH-activity is similar to that of LOX 1. The internal arrangement of refined PELOX is determined by NH3-YAMELLNXG-COOH. This arrangement is similar to that of cotLOX and rootLOX in 60% of the cases, and the new arrangement is similar to that of rootLOX in 60% of the cases. Now, some of these genes were cloned into RT-PCR and peLOX cDNA. In addition, in parallel, it is necessary to use a variety of LOX molecules to isolate and control the occurrence of LOX sieve-specific proteins. In addition, it is necessary to explore and organize the application of LOX molecules in the field of energy development. The results of this project are currently being prepared.