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トリプトファン・ナイアシン代謝の鍵酵素(ACMS脱炭酸酵素)の精製と性質

色氨酸和烟酸代谢关键酶（ACMS脱羧酶）的纯化及性质

基本信息

批准号：
07760130
负责人：
江頭祐嘉合
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトではナイアシン欠乏になると,ペラグラなどさまざまな疾病をひきおこすため,トリプトファンからナイアシンへの転換率は栄養学上重要である。この転換率は,栄養素やホルモンによって変動する。本年度の計画では,トリプトファンからナイアシン生合成経路の鍵酵素であるα-amino-β-carboxymuconate-ε-semialdehyde decarboxylase(ACMSD)の精製を試みた。精製は,比較的材料の得やすい豚の腎臓で行った。その結果,SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)で均一になるまで精製できた。方法は,豚の腎臓の可溶性画分を硫安分画後,疎水クロマトグラフィー,吸着クロマトグラフィー,イオン交換クロマトグラフィー,ゲル濾過処理(ブチルトヨパール,ヒドロキシアパタイト,DEAE-Sephadex,トヨパールHW55,Superdex,TSK-gel 3000SWカラムクロマトグラフィー)により行った。さらに精製された酵素の分子量,至適pH,基質α-amino-β-carboxymuconate-ε-semialdehydeに対するKm値を求め,化学修飾試薬を用い,本酵素の活性中心の情報検索を行った。その結果,分子量41KDa(SDS-PAGE),至適pH7.5,Km値1.61X10^<-5>Mで,活性中心にSH基の存在が示唆された。現在,論文を投稿中である。今後,この精製された酵素のモノクローナル抗体を作製し,それをもとにcDNAのクローニングを行い,トリプトファンからナイアシンへの転換率の栄養素,ホルモンによる変動のメカニズムを分子レベルで調べる予定である。

The change rate of the disease is important in nutrition. The rate of change is the same as the rate of change of nutrients. This year's project is to try to refine α-amino-β-carboxylate-ε-semialdehyde decarboxylase(ACMSD), a key enzyme in the biosynthesis pathway. Refined, comparative materials obtained in the process. As a result, SDS-PAGE was homogeneous and refined. Methods: After the soluble fractions of the kidney were purified, the solution was purified, sorbed, exchanged, filtered, and treated with DEAE-Sephadex,TSK-gel 3000 SW,Superdex,TSK-gel 3000SW. The molecular weight of the purified enzyme, the appropriate pH, the Km value of the matrix α-amino-β-carboxylate-ε-cysteine, the chemical modification test, and the information search of the active center of the enzyme are also carried out. The molecular weight was 41KDa(SDS-PAGE), and the optimum pH was 7.5, Km was 1.61X10^<-5>M. The SH group in the active center was detected. Now, papers are being submitted. In the future, the purification of enzymes and the production of anti-tumor antibodies will be carried out in a variety of ways, such as the selection of cDNA, the selection of hormones, the selection of molecules, and the selection of specific genes.