ルーメン菌のセルロース結合ドメインを持つ酵素機能の解明

阐明瘤胃细菌中具有纤维素结合域的酶的功能

• 批准号: 07760250
• 负责人: 苅田 修一
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760250/
• 关键词: ル-メ細菌; セルロース結合ドメイン; セルラーゼ

λZAPIIファージベクターを用いてRuminococcus albusF-40の染色体DNAの遺伝子ライブラリーを作成した。R. albusの培養液よりセルロースへの親和力で得られた蛋白質のN末端配列にはDNAプロープの作成に適したものが得られなかった。そこでライブラリーのなかでセルラーゼ活性を有するクローンをスクリーニングし、得られたクローンについて大腸菌で発現した酵素のセルロース結合能を調べた。この結果7つのセルラーゼ活性を有するクローンから1つのセルロース結合酵素を発現しているクローンを得た。このクローンは大腸菌内での安定性が低く遺伝子全体をクローンとして保持することが困難であった。このためにこのクローンから安定なサブクローンをとり、得られた遺伝子の塩基配列を自動塩基配列決定装置により決定した。この配列から推定される酵素の触媒ドメインの構造とセルロース結合ドメインの構造を疎水性クラスター分析により解析した。その結果本酵素はファミリー9の触媒ドメインとファミリーIIIのセルロース結合ドメインを有することが明らかになった。R. albusにおいて、この触媒ドメインのファミリーとセルロース結合ドメインの存在はこれまでに報告がなく全く新規なものであることが明らかになり、ルーメン最近のなかでセルロースの分解に貢献するR. albusがセルロース結合ドメインを持つセルラーゼ遺伝子を持っていることが証明できた。本遺伝子は大腸菌内での安定性が低く酵素全体の発現にはいたらなかった。今後本遺伝子の全体の解析と各ドメインの詳細な検討を予定している。

The lambda ZAPII chromosome was made with Ruminococcus albusF-40 chromosomes, DNA chromosomes, lambda chromosomes. R. Albus. The protein was arranged at the N-terminal of the protein. The protein was arranged in the N-terminal column. The protein was arranged in the N-terminal column. The DNA protein was arranged in the N-terminal. In the first place, the activity of the enzyme was detected by the combination of enzymes and microbiology. the results showed that the activity of the bacteria was higher than that of the control group. The results showed that the activity of the enzyme-linked immunosorbent assay (enzyme-linked immunosorbent assay) combined with enzyme assay showed that the activity was successful. The stability of the fungus is low and the whole body is not stable. It is necessary to make a decision on the basis of the automatic equipment for determining the allocation of columns on the basis of the automatic equipment. This is a combination of presumption, enzyme, catalyst, enzyme, enzyme, The results showed that the enzyme was sensitive to 9% catalyst, and the enzyme was sensitive to III. R. Albus, albus, and so on. In combination with each other, there was a significant increase in the number of new rules and regulations. In the report, there was a significant increase in the number of new rules and regulations. The stability and low enzyme levels in the fungus of this fungus have been detected. In the future, all of us will analyze the predetermined information of each person.