ルーメン細菌のセルラーゼ複合体セルロソーム構造の解明

瘤胃细菌纤维素酶复合物的纤维素体结构的阐明

• 批准号: 09760243
• 负责人: 苅田 修一
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760243/
• 关键词: ルーメン細菌; セルラーゼ; セルラーゼ複合体; セルロソーム; ドッキングドメイン; 植物繊維分解

セルラーゼ複合体に必要とされるドッキングドメインをコードする遺伝子を発現ベクターpMa1-c2に連結し、マルトース結合ドメインとドッキングドメインとの融合蛋白質を大腸菌で発現し、これを精製した。これを用いてルーメン細菌Ruminococcus albusの培養液及び細胞表層画分についてFar-Western法により結合する蛋白質の有無を確認したが、ドッキングドメインが結合する蛋白質を検出するに至らなかった。セルラーゼ遺伝子周辺領域のクローニングにおいて新たなセルラーゼ遺伝子egVIIのクローニングに成功した。本遺伝子の塩基配列を決定したところ、このセルラーゼもドッキングドメインをもっており、間接的ではあるが、ルーメン細菌R.albusがセルラーゼ複合体セルロソームを形成している可能性をしめした。一方R.albusの細胞表層から調製した蛋白質画分を電気泳動した結果、複合体の骨格蛋白質の候補と考えられる酵素活性をしめさない分子量100kDを超える蛋白質を発見した。この蛋白質のN末端アミノ酸配列を15残基決定することができた。この蛋白質をコードする遺伝子のクローニングを行う予定である。

The fusion protein of pMa1-c2 was developed and purified in E. coli. The presence or absence of binding protein was confirmed by Far-Western analysis of culture medium and cell surface of Ruminococcus albus. The new version of the new version of the new The base alignment of this gene is determined by the possibility of forming a complex of R.albus and R.albus indirectly. The protein composition of R.albus cell surface layer was modulated by electrokinetic method. The protein composition of complex was detected by enzyme activity. The molecular weight of protein was 100kD. The N-terminal amino acid sequence of this protein is determined by 15 residues. The protein content is determined by the protein content.