三量体GTP結合蛋白質とムスカリン性K^+チャネルの相互作用の解析

三聚体 GTP 结合蛋白与毒蕈碱 K^+ 通道之间的相互作用分析

• 批准号: 07770058
• 负责人: 稲野辺 厚
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770058/
• 关键词: カリウムチャネル; G蛋白質

三量体G蛋白質(G蛋白質)βγサブユニットにより活性が制御される内向き整流カリウムチャネル(K_Gチャネル)は、中枢神経系、心房等に存在することが電気生理学的に知られていた。ところが、K_Gチャネルの活性化がβγサブユニットによる直接的な相互作用によるものか、結論付けられてはいなかったので、K_Gチャネルの構成分子として1994年にcloningされたGIRK1とG蛋白質との相互作用が解析可能ではないかと考えられた。そこで、細胞質側に露出していると推測されるGIRK1のN末端及び、C末端の両領域を大腸菌で発現し、G蛋白質との結合実験を行った。その結果、βγサブユニットとGIRK1のC末端は直接結合し、その様式はG蛋白質活性化機序と合致することが明らかとなった。K_Gチャネルを生化学的に検討するために、GIRK1のC末端領域に対する抗体を作製した。この抗GIRK1抗体は、大脳、小脳、心房、そし精巣の細胞膜画分中において、電気泳動上55-70kDaの蛋白質を認識した。これらの分子量の差異は、各組織における糖鎖修飾の差異によるものと考えられる。そこで抗GIRK1抗体を用いて、大脳に発現するGIRK1を含むK_Gチャネルの解析を行った。その結果、免疫沈降法による解析から、数種の蛋白質の複合体として存在すること、ショ糖密度勾配法とゲルろ過法による解析から、その複合体はtetramerとして存在することが明らかになった。さらに、免疫組織染色法により、GIRK1は第三脳室周辺において、presynapseに局在することが明らかとなった。中枢神経系において、K_Gチャネルはpostsynaptic inhibitionに関与すると考えられている。つまりこの結果は、synapse制御機構において、GIRK1を含むK_Gチャネルはpresynaptic inhibitionに関与し、postsynaptic inhibitionには他のチャネル蛋白質からなるK_Gチャネルが機能していることを示すものと考えられる。

Three quantities of G protein (G protein)βγIn 1994, the cloning of GIRK1 and the interaction of G protein were analyzed. It is estimated that the N-terminal and C-terminal regions of GIRK1 are discovered in E. coli and the binding of G protein is carried out. As a result, βγK_G gene production in biochemical studies, GIRK1 C-terminal domain antibody production These anti-GIRK1 antibodies recognize proteins of 55-70kDa in the cell membrane fractions of large, small, atrial, and sperm. The difference in molecular weight between tissues is due to the difference in sugar chain modification. The anti-GIRK1 antibody was used in the analysis of GIRK1 and GIRK1 protein. The results of immunoprecipitation analysis, the existence of several protein complexes, sugar density matching analysis, and the existence of protein complexes were analyzed. In addition, GIRK1 is located in the third chamber of the body. Central nervous system, K_G, K_G The results are as follows: Synapse control mechanism, GIRK1, K_G, K_G, K, K_G, K, K_G, K_G, K, K_G, K, K

项目成果

Atsushi Inanobe: "Immunological and physical characterization of the brain G protein-gated muscarinic potassium channel" Biochemical and Biophysical Research Communications. 217. 1238-1244 (1995)

Atsushi Inanobe：“大脑 G 蛋白门控毒蕈碱钾通道的免疫学和物理特征”生物化学和生物物理研究通讯。