がん関連抗原GD3の発現調節機構および生物学的機能の解析

1.がん細胞におけるGD3の発現調節機構の解析(1)ヒトメラノーマをはじめとした種々の株化された神経外胚葉由来のヒトがん細胞を用いてGD3の発現とGD3合成酵素活性を調べた。その結果、GD3の発現とGD3合成酵素活性の強さは相関があることが分かった。さらにがん細胞においてGD3合成酵素が転写レベル、翻訳レベルあるいは翻訳後修飾等のどのレベルで遺伝子発現が調節されているかを明らかにするためにGD3合成酵素のmRNAの発現量と抗GD3合成酵素ペプチド抗体を用いたタンパク質の発現量の解析を行っている。(2)in vitroにおける細胞のがん化とGD3の発現調節機構の解析ラット3Y1細胞にアデノウイルスE1A遺伝子を導入し、形質転換したCY1細胞においてGD3ガングリオシドの発現が上昇することがSanaiらにより、報告されている。本研究では、形質転換したCY1細胞では実際にGD3合成酵素活性が上昇していることを明らかにした。また、がん化に伴うGD3合成酵素の転写レベルでの発現調節機構を解析するために、3Y1細胞とCY1細胞からmRNAを抽出し、ラットGD3合成酵素cDNAをプローブとしたノーザンブロティングを試みた。2.腫瘍マーカーとしての抗GD3合成酵素抗体の臨床応用の可能性の検討悪性度の異なるメラノーマ、ニューロブラストーマなどのがんの病理組織および正常組織の免疫組織染色を行い目的でGD3合成酵素に対する抗体作製を行うために抗原とするGD3合成酵素タンパク質の大腸菌における大量発現系を作製した。GD3合成酵素タンパク質はGST-融合タンパク質として発現させ、アフィニティー精製後、GST部分から切り離して、GD3合成酵素タンパク質を得ることができた。現在、ウサギに免疫中である。

1.がん細胞におけるGD3の発現調節機構の解析(1)ヒトメラノーマをはじめとした種々の株化された神経外胚葉由来のヒトがん細胞を用いてGD3の発現とGD3合成酵素活性を調べた。その結果、GD3の発現とGD3合成酵素活性の強さは相関があることが分かった。さらにがん細胞においてGD3合成酵素が転写レベル、翻訳レベルあるいは翻訳後修飾等のどのレベルで遺伝子発現が調節されているかを明らかにするためにGD3合成酵素のmRNAの発現量と抗GD3合成酵素ペプチド抗体を用いたタンパク質の発現量の解析を行っている。(2)in vitroにおける細胞のがん化とGD3の発現調節機構の解析ラット3Y1細胞にアデノウイルスE1A遺伝子を導入し、形質転換したCY1細胞においてGD3ガングリオシドの発現が上昇することがSanaiらにより、報告されている。本研究では、形質転換したCY1細胞では実際にGD3合成酵素活性が上昇していることを明らかにした。また、がん化に伴うGD3合成酵素の転写レベルでの発現調節機構を解析するために、3Y1細胞とCY1細胞からmRNAを抽出し、ラットGD3合成酵素cDNAをプローブとしたノーザンブロティングを試みた。2.腫瘍マーカーとしての抗GD3合成酵素抗体の臨床応用の可能性の検討悪性度の異なるメラノーマ、ニューロブラストーマなどのがんの病理組織および正常組織の免疫組織染色を行い目的でGD3合成酵素に対する抗体作製を行うために抗原とするGD3合成酵素タンパク質の大腸菌における大量発現系を作製した。GD3合成酵素タンパク質はGST-融合タンパク質として発現させ、アフィニティー精製後、GST部分から切り離して、GD3合成酵素タンパク質を得ることができた。現在、ウサギに免疫中である。