GD3合成酵素遺伝子により誘導される細胞増殖シグナルの分子機構

GD3合酶基因诱导细胞增殖信号的分子机制

• 批准号: 11139228
• 负责人: 古川 鋼一
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11139228/
• 关键词: ガングリオシド; メラノーマ; 細胞増殖; シグナル; GD3; 糖転移酵素

本研究ではヒトのメラノーマ細胞、PC12細胞などを用いて、GD3合成酵素遺伝子の操作による糖鎖リモデリングを行い、GD3発現によって誘導される細胞増殖亢進の分子機構の解明を目ざした。(1)GD3合成酵素遺伝子を導入したPC12細胞における細胞内シグナル分子の変化を検討した。これらの遺伝子導入細胞ではTrkA、MAPキナーゼが恒常的に活性化しており、NGFの刺激前も刺激後120分も全く変化しなかった。更にクロスリンキング法による二量体形成の有無の検討を行ったところ、全ての遺伝子導入・発現細胞においてNGF刺激に関係なく二量体bandが検出された。コントロールでは刺激後のみに二量体bandを認めた。(2)GD3合成酵素遺伝子の発現を抑制するために、cDNAの全長又は2種の部分配列を逆方向に発現ベクターに挿入したアンチセンスcDNAベクターを作成し、各々の変異細胞株を樹立した。最短のアンチセンス導入細胞を除いて、GD3発現レベルが約5分の1に低下すると共に、細胞増殖度が約2分の1に低下した。(3)ヒト培養メラノサイトに対し、メラノサイトにGD3合成酵素遺伝子を安定発現させ、その形質変化を観察した。細胞が紡錘型から上皮型に形態変化し突起の短縮を認めたが、増殖度には変化を認めなかった。(4)ヒトメラノーマ細胞株MeWoの培養液中に抗GD3抗体R24を添加したところ、約10μg/mlの濃度で著明な増殖抑制が認められた。同時にPI染色で細胞死が認められ、GD3を介する細胞死の誘導が示された。ガングリオシド糖鎖による増殖因子受容体のmodulationについては以前から提唱されてきたが、今回、TrkAの恒常的リン酸化と二量体形成など、化学構造上の変化が、糖鎖変化により惹起されることが初めて示された。また、今回示されたメラノーマ細胞におけるGD3発現レベルと増殖度の相関や、抗GD3抗体による培養メラノーマの増殖抑制効果はGD3の役割を再認識させるものであり、現在、抗体による増殖抑制の分子機序を解明中である。

The purpose of this study is to determine the molecular mechanism of cell proliferation by using PC12 cells, GD3 synthetic enzymes, and GD3. The main results are as follows: (1) the GD3 synthesis enzyme was introduced into the PC12 cell, the intracellular enzyme, the molecule and the enzyme. The cells were divided into TrkA, MAP stimulation, constant activation activation and NGF before stimulation. The formation of the two-dimensional body is more sensitive to the formation of the two-dimensional body, and the whole body is loaded into the cell, the NGF stimulation, the band of the two-dimensional body. After stimulation, two-dimensional band was detected. (2) GD3 biosynthetic enzyme was used to inhibit the growth of yeast, and the whole length and length of cDNA were partially arranged in the opposite direction. The whole length and length of cDNA were partially arranged in the opposite direction. In the shortest period of time, the number of cells was removed, and that of GD3 was found to be about 5 points, 1 points, 1 points, 2 points, 1 points, and 2 points, respectively. (3) make sure that the GD3 synthesis enzyme is stable and stable, and that the shape of the enzyme is changed. The cellular type, the epithelial type, the shape, the protuberances, the colonies. (4) the anti-GD3 antibody R24 was added to the culture solution of anti-GD3 antibody R24 and the concentration of anti-GD3 antibody R24 was about 10 μ g

项目成果

Tetsuya Okajima et al.: "Molecular cloning and expression of mouse GD1α/GT1aα/GQ1bα synthase (ST6 GalNAc VI) gene."J. Biol. Chem.. (in press).

Tetsuya Okajima 等人：“小鼠 GD1α/GT1aα/GQ1bα 合酶 (ST6 GalNAc VI) 基因的分子克隆和表达。”J. Biol。

Tetsuya Okajima et al.: "Human homolog of Caenorhabditis elegans sqv-3 gene is galactosyl-transferase I involved in the biosynthesis of the glycosaminoglycan-protein linkage region of proteoglycans."J.Biol.Chem.. 274. 22915-22918 (1999)

Tetsuya Okajima 等人：“秀丽隐杆线虫 sqv-3 基因的人类同源物是半乳糖基转移酶 I，参与蛋白多糖糖胺聚糖-蛋白质连接区域的生物合成。”J.Biol.Chem.. 274. 22915-22918 (1999)

Satoshi Fukumoto et al.: "GD3 synthase gene expression in PC12 cells results in the continuous activation of TrkA and ERK1/2 and enhanced proliferation."J. Biol. Chem.. (in press).

Satoshi Fukumoto 等人：“PC12 细胞中 GD3 合酶基因的表达导致 TrkA 和 ERK1/2 的持续激活并增强增殖。”