B群赤痢菌のプラスミド上の細胞侵入性及び細胞間拡散に関わる新しいビルレンス遺伝子

B群志贺菌质粒上涉及细胞侵袭和细胞间传播的新毒力基因

• 批准号: 07770208
• 负责人: 打矢 恵一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Meijo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770208/
• 关键词: Shigella flexneri; virA遺伝子; 細胞侵入性; 細胞間拡散

B群赤痢菌の保有する大プラスミド上に同定したビルレンス遺伝子、virAの機能について今回の研究により、新たに以下のことが明らかになった。1.遺伝子が細胞侵入性にどの程度関与しているのか培養細胞(MK2)に菌を感染させた後、gentamicinにて細胞外の菌を殺菌し細胞内に侵入した菌数を算定することによって調べた結果、virA変異株では親株に比べて約80%、そのレベルの低下が見られた。このことから、本遺伝子は細胞間拡散に加えて細胞侵入性にも関与していることが示された。2.virA変異株のIpa蛋白(細胞侵入性に関与している蛋白群;IpaB,C,D)の発現への影響をそれぞれの抗体を用いてウエスタンブロットおよびELISA法により調べたが、virA変異株でもそれらの蛋白は正常に産生され、また分泌されていた。このことから、VirAの細胞侵入性への関与はIpa蛋白を介するものではなく、直接に関与していることが示された。3.VirAの局在をその抗体を作製してウエスタンブロット法により調べた結果、VirAは細胞外(菌体外)に分泌されることがわかった。さらにその分泌は、Ipa蛋白の分泌に関与している大プラスミド上の遺伝子、spa・mixにより調節されていた。4.ルシフェラーゼを用いたプロモーター・アッセイ法により、感染細胞内でのvirAの遺伝子発現を経時的に調べた結果、細胞との接触時(細胞侵入時)よりも菌が拡散を行う時にその発現の上昇がみられた。以上の結果より、virAは細胞侵入性にも関与するが、本来、細胞間拡散を行うのに必要な遺伝子である可能性が示唆された。当初、VirAの細胞間拡散への関与は、VirG(細胞間拡散に関与している蛋白)の発現を転写レベルで低下させることによって起こるものと考えていたが、しかしvirA変異株にcloned virGを挿入して相補試験を行ってもその回復が見られなかったことから、virAの細胞間拡散への関与は直接的なものであることが示された。今後、どのようにvirAが細胞間拡散に関与しているのか、そのメカニズミを調べてゆきたい。

Group B Shigella dysenteriae has been identified as the same as that of group B Shigella dysenteriae. The virA machine is responsible for the current study, and the following information is available. 1. The degree of cell invasion was different from that of cell invasion (MK2). After infection, the number of bacteria invaded by extracellular bacteria was calculated. The results showed that the ratio of virA strains was 80%, and that of Escherichia coli was lower. The intercellular dispersion and intrusive spores of the mother cell and the cell of the mother cell are shown to be positive. The Ipa protein of 2.virA strain (cell invasive protein and protein group; IpaB,C,D) was detected by Elisa. The antibody was detected by ELISA method, the protein of virA strain was normal, and the antibody was secreted. Cell invasion was mediated by VirA protein, cell invasion was mediated by Ipa protein, and direct infection was detected by cell invasion. The results of 3.VirA antibody assay and VirA extracellular secretion assay were used in this study. The secretion of Ipa protein, the secretion of Ipa protein, and the secretion of protein, protein and protein. 4. The results were analyzed by using the method of Elisa, the results of the positive results of the infected intracellular virA fragments, and the results of the positive cells during contact (when the cells invaded). When the cells invaded, the positive cells were detected. The results of the above results, the possibility of instigation and instigation of virA cell invasive cell invasion, original and intercellular dispersion, and the possibility of instigation of cell invasion. At the beginning, the intercellular dispersion of VirA and VirG (intercellular dispersion and protein) were used to test the registration of low-level and low-level cloned virG, and to register the cloned virG of each other. The virA intercellular dispersion protocol is similar to that of the direct intercellular dispersion protocol. In the future, the virA will be divided into two groups: the intercellular dispersion and the intercellular dispersion.

项目成果

Keiichi Uchiya: "Identification of a novel virulence gene, virA, on the large plasmid of Shigella, involved in invasion and intracellular spreading" Molecular Microbiology. 17. 241-250 (1995)

Keiichi Uchiya：“鉴定志贺氏菌大质粒上的一种新毒力基因 virA，参与入侵和细胞内传播”《分子微生物学》。