メチシリン耐性黄色ブドウ球菌の高度耐性化機構に関する研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌高耐药机制研究

• 批准号: 07770339
• 负责人: 中尾 歩
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770339/
• 关键词: MRSA; 高度耐性化; insevtion uwtagensis

メチシリンのMIC=16μg/mlの臨床分離MRSAでKAN96をrecipientとして、Tn918によるinsertion mutagenesisを行って得られたMIC=64μg/mlの高度耐性株KAN96H1トKAN96H2を用いて以下の実験を行い結果を得た。1、KAN96H1及びKAN96H2をdonor、KAN96をrecipientとしてintenational typing phage96を介した形質導入実験を行ったところ、KAN96H2ですべてが16μg/mlであった。このことからKAN96H1はTn918の挿入が原因で高度耐性化した株であり、KAN96H2は挿入とは無関係に偶然得られた高度耐性株であると考えられた。2、KAN96H1の染色体DNAを用い、pAM120をprobeとしてSouthern hybridizationを行ったところ、Tn918はHindIII6.1kbp断片に挿入されていることが明らかとなった。次いで、この断片を大腸菌にクローニングした。3、クローニングされた断片の塩基配列をdideoxy法により決定した。この断片には同方向に連なる5つのORFが含まれており、オペロン様構造を有していることがわかった。4、HindIII6.1kbpをprobeとして、KAN96、KAN96H1、KAN96H2のwhole cell RNAを用いてNorthern hybrodizationを行ったところ、KAN96では4.7kbの位置にbandを認めたのに対し、KAN96H1では2.3kbの位置にbandを認め、KAN96H2では全く発現を認めなかった。以上から、HindIII6.1kbはtranscr unitを含んでおり、その転写に異常が起きると高度耐性化が生じると考えられた。5、由来の異なる黄色ブドウ球菌8株の染色体DNAを用い、HindIII6.1kbpをprobeとしてSouthern hybridizationを行ったところ、使用した8株全てがこの断片を保有していることがわかった。以上の結果を元に、海外雑誌に投稿準備中である。

A highly resistant strain KAN 96H1/KAN 96H2 with MIC=64μg/ml was isolated from MRSA with MIC=16μg/ml. 1. KAN96H1 and KAN96H2 are donor, KAN96 is recipient and intentional-typing phase 96 is introduced. KAN96H2 is 16μg/ml. KAN96H1, KAN96 H2, KAN 96 H2, KAN 96 H1, KAN96H2, KAN96H2, KAN96 H1, KAN96H2, KAN 96 H 2. KAN96 H1 chromosome DNA fragment, pAM120 probe, Southern hybridization fragment, Tn918 HindII6.1kbp fragment In the middle of the day, there was a large amount of E. coli. 3. The dimethoxy method is used to determine the base alignment of fragments. This fragment is connected in the same direction. The ORF contains the structure of the fragment. 4. HindIII6.1kbp probe, KAN96, KAN96 H1, KAN96 H2 whole cell RNA with Northern hybridization, KAN96 with 4.7kb band, KAN96 H1 with 2.3kb band, KAN96 H2 with complete RNA. Above, HindIII6.1kb transcr unit contains 5. The chromosome DNA of 8 strains of Heterococcus luteus was used in the middle of HindIII 6.1kbp probe and Southern hybridization was carried out in the middle of HindIII 6.1kbp probe and 8 strains of Heterococcus luteus were used in the middle of HindIII 6.1kbp probe and Southern hybridization was carried out in the middle of HindIII 6.1kbp probe. The above results are in preparation for overseas submissions.