膵癌におけるゲノムの不安定性と膵液を用いたその臨床診断的応用

胰腺癌的基因组不稳定性及其胰液诊断的临床应用

• 批准号: 07770361
• 负责人: 渡辺 弘之
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770361/
• 关键词: replication error(RER); Non-radioisotopic PCR-SSCP法; K-ras癌遺伝子; PCR-RFLP法; PCR-HPA法; p53癌抑制遺伝子; 膵液遺伝子診断; 膵癌

これまで,私は,膵液中K-ras癌遺伝子点突然変異の検索による膵癌診断の有用性について報告してきた(Jpn J Cancer Res 84:961,1993;Pancreas 12:18,1996)。また,新しくacridinium esterをラベルしたプローブを用いた化学発光によるK-ras変異型の簡便な検出法を開発し(Jpn J Cancer Res(in press)),臨床診断法としてその有用性が期待されている。しかし,これらの診断率は65〜80%前後で100%ではなく,また病理学的には良性とされる腺腫の粘液産生膵腫瘍にも陽性例が存在している。そのため,癌化後に変異が生じるとされているp53癌抑制遺伝子のexon5〜8に関してnon-radioisotopic PCR-SSCP法にて膵液について検索したところ,粘液産生膵腫瘍や慢性膵炎症例には変異はみられず,一方,膵癌症例では45%にp53変異がみられ,さらに,K-ras変異陰性でp53変異陽性の症例もみられ,膵液中のK-rasとp53の遺伝子変異の検索を組み合わせることで,膵癌の診断効率を高めることが期待された。最近,新たな発癌に関連する遺伝子異常として,DNAミスマッチ修復遺伝子(hMSH2,hMLH1,hPMS1,hPMS2,GTBP)の変異が同定され,遺伝性非腺腫症性大腸癌などの原因とされ,microsatellite instability(MI)によるDNAの不安定性と発癌との関連が重要視されている。今回,膵臓癌におけるDNA不安定性の発現頻度を検索した。通常型膵癌5例を対象に,方法は,ホルマリン固定パラフィン包埋された切除膵組織よりmicrodissection法にて,癌部と非癌部のDNAを抽出し,DNAミスマッチ修復異常を反映するmicrosatellite領域(D2S123,D18S58,BAT40,BAT26,D9S63,D9S146,D17S513)のそれぞれに対するプライマーを作成した。これらのプライマーを用いてPCRを行ない,その後グラジエントゲル電気泳動と銀染色により検討した。これらの領域のうち,2つ以上の異常を異常がみられるものについてreplication error(RER)陽性と判定した。5例中3例(60%)にRER陽性であった。K-rasは,5例すべてに陽性であり,p53については現在検索中である。今後,症例数を蓄積して引き続き検討する予定である。また膵液を用いたMIの検討も行う予定であり,K-rasおよびp53の遺伝子異常との関連性ならびにその臨床診断的意義についても明らかにして行く方針である。

The significance of sudden changes in K-ras oncogene loci in the serum for diagnosis of cancer is reported (Jpn J Cancer Res 84:961, 1993;Pancreas 12:18, 1996). A new method for the detection of K-ras variant was developed (Jpn J Cancer Res(in press)) and its usefulness in clinical diagnosis is expected. The diagnostic rate of this disease was 65 ~ 80%, 100%, and the positive cases of benign adenomas and mucus production were only present in pathology. P53 cancer suppressor gene exon5 ~ 8 is related to non-radioisotopic PCR-SSCP method, mucus production, tumor and chronic inflammation cases are related to p53, cancer cases are related to p53, K-ras is related to p53, and K-ras is related to p53. K-ras and p53 in the serum are different from each other. Recently, the genetic abnormalities associated with new cancer development have been identified, and differences in DNA repair genes (hMSH2, hMLH1, hPMS2,GTBP) have been identified. The causes of genetic nonadenomatous colorectal cancer have been identified, and microsatellite instability(MI) has been identified as an important factor in the relationship between cancer development and DNA instability. Now, the frequency of DNA instability in cancer is estimated. 5 cases of common type cancer were detected by microdissection method, DNA was extracted from cancerous and non-cancerous parts, and DNA was detected by microsatellite domain (D2S123, D18S58,BAT40,BAT26, D9S63, D9S146, D17S513). This is the first time that we've had a chance to do this. If the error is not detected, the error is detected. 3 out of 5 cases (60%) were RER positive. K-ras, 5 cases, positive,p53, negative, present. In the future, the number of cases will accumulate. K-ras and p53 gene abnormalities and their relevance to clinical diagnosis

项目成果

渡辺弘之,ほか: "小膵癌に診断における膵液中腫瘍マーカーの測定とK-ras点突然変異の検索." 消化器内視鏡. 7. 1137-1146 (1995)

Hiroyuki Watanabe 等人：“胰液中肿瘤标志物的测量和 K-ras 点突变的诊断在胃肠道内窥镜检查中的应用”（1995 年）。