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肺組織傷害と好中球に関する基礎的研究-肺胞に存在する好中球抑制因子の分離・精製ならびに肺組織傷害に対する影響-

肺组织损伤和中性粒细胞的基础研究 - 肺泡中中性粒细胞抑制因子的分离纯化及其对肺组织损伤的影响 -

基本信息

批准号：
07770416
负责人：
諏訪部章
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770416/
关键词：
肺傷害好中球スーパーオキサイドサーファクタント

项目摘要

人口の高齢化に伴い,長期にわたる喫煙や環境汚染因子に対する長期暴露の結果、肺組織傷害に起因する気腫化・線維化などの呼吸器疾患が増加している。特に成人型呼吸窮迫症候群(ARDS)は致死率が高く比較的若い世代をも巻き込む社会的疾患となっている。これら疾患の発症には、肺胞滲出好中球とそれが放出する組織傷害性のプロテアーゼや活性酸素などが深く関与している。我々は、肺胞領域に存在する好中球機能抑制因子に着目しその分離・精製ならびに治療への臨床応用について研究を進めてきた。計画書で述べたように、ラット肺胞洗浄液から遠心により細胞成分およびサーファクタント成分を除去した上清中にヒト好中球のスーパーオキサイド産生および接着を抑制する生理活性物質が存在することを見い出した。この抑制活性は、100℃、10分の熱処理にて失活したことから、蛋白性抑制因子であり、またSODのような消去剤とは異なる新種の活性物質と考えられた。今年度はさらに、実験を押し進め、この因子の分子量をSuperdex G-200のカラムクロマトグラフィーにて推定したところ、200〜300kDaの中等度の蛋白分子であることが判明した。また、ラット肺洗浄中には、遊離型のSP-AやSP-Dなどの比較的高分子のサーファクタント特異的蛋白が存在している。我々はこの抑制活性がこれらサーファクタント特異蛋白に由来するのではないことを検証するため、抗ラットSP-A抗体(モノクローナル)や抗ラットSP-D抗体(ポリクローナル)による中和試験を施行した。しかし、好中球スーパーオキサイド産生抑制はこれら抗体によって抑制されなかったことより、この抑制活性を有する蛋白は新種の蛋白である可能性が益々強まった。現在も精製を進めており、蛋白の同定ならびに抗体作成に取り組んでいる。

Population growth is accompanied by an increase in respiratory diseases as a result of long-term exposure to smoke and environmental pollution factors, and as a result of lung tissue damage In particular, adult respiratory distress syndrome (ARDS) has a high mortality rate. The development of this disease is related to the release of active acids from the lungs. We are interested in the isolation, purification, and clinical application of the inhibitory factors of good globular function existing in the lung. In the plan, the physiological active substances existing in the supernatant of the lung cell wash solution are removed from the supernatant, and then inhibited. The inhibitory activity of SOD was inactivated by heat treatment at 100℃ for 10 min. The protein inhibitory factor was eliminated by heat treatment at 100 ℃. The molecular weight of this factor is Superdex G-200 and the molecular weight of this factor is estimated to be 200 ~ 300kDa. In addition, free SP-A and SP-D proteins exist in the lung tissue. The inhibitory activity of SP-A and SP-D antibodies was detected by neutralizing assays. The results showed that SP-A and SP-D antibodies were inhibited by SP-A and SP-D respectively. The possibility of producing an inhibitory antibody, an inhibitory protein, and a new protein is enhanced. Now we are refining, protein identification and antibody preparation.