単離心筋細胞Stunningモデルに対するCa^<2+>sensitizerの効果

Ca^2+敏化剂对离体心肌细胞击晕模型的影响

• 批准号: 07770536
• 负责人: 木下 知子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770536/
• 关键词: calcium; myocardial stunning; contractility; cardiac myocyte

目的:Stunning心筋の細胞単離を試み、細胞内Ca^<2+>動態(Ca^<2+>transient)を観察、control細胞と比較した。さらにCa^<2+>sensitizer(Pimobendan)の効果を検討した。方法:1)心筋細胞の単離。ラット摘出心を好気的条件のランゲンドルフ法にて、低Ca緩衝液、コラゲナーゼ等で順次灌流後、左室を細切し、酵素溶液にてincubate、濾過法にて心筋細胞浮遊液を得、control細胞とした。2)stunning細胞の作成。ラット摘出心をランゲンドルフ法にて10分間のglobal ischemiaを誘発し、その後同様の方法で心筋細胞を単離した。3)細胞内Ca^<2+>濃度のモニター。Ca^<2+>感受性蛍光指示薬としてFura-2/AMを用いた。心筋細胞は色素負荷後、顕微鏡ステージ上のchamberに置きTyrode溶液にて灌流。340nm/380nmのXe励起光による500nmの蛍光強度比を、光電子増倍管にて測定した。chamber全体に0.5Hzの電気的刺激を加え、細胞を拍動させCa^<2+>transientを得た。4)細胞の収縮性は光学的方法(edge-detection system)によりモニターした。結果:1)stunning細胞の収縮振幅はcontrol細胞より小さい傾向がみられた。2)stunning細胞ではcontrol細胞と比較して、resting[Ca^<2+>]iレベルの上昇がみられた。3)Ca^<2+>transientの振幅はstunning,control細胞間に有意差は認められなかった。4)10^<-6>M Pimobendan添加により、control細胞、Stunning細胞ともにCa^<2+>transientの振幅は影響を受けなかったが収縮振幅は増大した。結論:Ca^<2+>sensitizerは心筋細胞のCa^<2+>感受性を亢進させ、stunningをも軽減させる可能性をもつことが示唆された。

Purpose: To test the isolation of Stunning cardiomyocytes, observe intracellular Ca^<2+>transient (Ca^<2+>transient), and compare control cells. The effect of さらにCa^<2+>sensitizer (Pimobendan) is the same. Methods: 1) Isolation of cardiac muscle cells. The conditions for good extraction of the heart from the heart are: after sequential perfusion of the のランゲンドルフにて, low Ca buffer solution, コラゲナーゼ, etc., the left ventricle It was finely chopped, the enzyme solution was incubated, the heart muscle cell suspension was obtained by filtration, and the control cells were obtained. 2) Creation of stunning cells.ラット extract the heart をランゲンドルフ method にて 10 minutes のglobal ischemia を induce 発 し, その后同様のmethod でcardioblasts を単leave した. 3) The concentration of Ca^<2+> in the cell is determined. Ca^<2+> sensitive light indicates 薬としてFura-2/AMを用いた. After the myocardial cells were loaded with pigment, they were perfused with Tyrode solution in the chamber of the microscope. 340nm/380nmのXe excitation light intensity ratio, 500nm light intensity ratio, and photoelectron multiplier tube measurement. The whole chamber is stimulated by 0.5Hz electric current, and the cells are vibrated by Ca^<2+>transient. 4) Optical method of cell shrinkage (edge-detection system) is used. Results: 1) The contraction amplitude of the stunning cells and the tendency of the control cells are small and small. 2) Stunning cell, control cell, comparison, resting[Ca^<2+>]iレベルのrise, がみられた. 3) The amplitude of Ca^<2+>transient is stunning, and the intentional difference between control cells is recognized. 4) 10^<-6>M Pimobendan adds により, control cells, and Stunning cells, and the ともにCa^<2+>transient のamplitude は is affected by the けなかったが contraction amplitude は増大した. Conclusion: The Ca^<2+> sensitizer in myocardial cells is hypersensitive and the possibility of stunning is reduced.