Menkes病の遺伝子解析・遺伝子診断

Menkes病(MNK)患者のリンパ球を用いてreversetranscription-PCR(RT-PCR)法で銅輸送ATPase(ATP7A)の遺伝子解析を行った。材料と方法:症例は臨床症状および生化学的分析から古典的Menkes病と診断された3歳の男児で、患者および健常者から採取したリンパ球をEBウイルスにより形質転換したリンパ球を用いた。これらリンパ球からtotalRNAを抽出し、オリゴプライマーでcDNAを作成した。MNKcDNAを重複する約1.3kbpの4つのセグメントに分け、それぞれプライマーを作成し、RT-PCRでそれぞれを増幅した。PCR産物を電気泳動し、ゲルから目的のDNAを抽出したキットを用いてサブクローニングを行った。サブクローニングした2本鎖DNAからシークエンスキットを用いて螢光標識し、シークエンサーで塩基配列を調べた。結果および考察:対照と患者のcDNAからPCRで増幅したものを電気泳動した結果、約1.3kbのバンドを確認することが出来た。その内、患者のセグメント4のバンドが対照のバンドより約100bp小さかった。セグメント4の塩基配列をシークエンサーで検討した結果、患者のセグメント4はMNKcDNAのエクソン22(103bp)が完全に欠落していた。エクソン22は2つの膜貫通ドメインをコードしており、本例ではこの部分の欠損のため、ATP7Aが機能していないと考えられた。エクソン22の欠落は今まで報告がなく、今後本例でゲノムDNAを解析し、欠落の原因を明らかにする予定である。また本症例の家族の遺伝子検索で保因者診断、胎内診断が可能であると考えられた。

Menkes病(MNK)患者のリンパ球を用いてreversetranscription-PCR(RT-PCR)法で銅輸送ATPase(ATP7A)の遺伝子解析を行った。材料と方法:症例は臨床症状および生化学的分析から古典的Menkes病と診断された3歳の男児で、患者および健常者から採取したリンパ球をEBウイルスにより形質転換したリンパ球を用いた。これらリンパ球からtotalRNAを抽出し、オリゴプライマーでcDNAを作成した。MNKcDNAを重複する約1.3kbpの4つのセグメントに分け、それぞれプライマーを作成し、RT-PCRでそれぞれを増幅した。PCR産物を電気泳動し、ゲルから目的のDNAを抽出したキットを用いてサブクローニングを行った。サブクローニングした2本鎖DNAからシークエンスキットを用いて螢光標識し、シークエンサーで塩基配列を調べた。結果および考察:対照と患者のcDNAからPCRで増幅したものを電気泳動した結果、約1.3kbのバンドを確認することが出来た。その内、患者のセグメント4のバンドが対照のバンドより約100bp小さかった。セグメント4の塩基配列をシークエンサーで検討した結果、患者のセグメント4はMNKcDNAのエクソン22(103bp)が完全に欠落していた。エクソン22は2つの膜貫通ドメインをコードしており、本例ではこの部分の欠損のため、ATP7Aが機能していないと考えられた。エクソン22の欠落は今まで報告がなく、今後本例でゲノムDNAを解析し、欠落の原因を明らかにする予定である。また本症例の家族の遺伝子検索で保因者診断、胎内診断が可能であると考えられた。