原核細胞における酸性加温による細胞内分子の損傷メカニズム

原核细胞酸加热损伤细胞内分子的机制

• 批准号: 07770765
• 负责人: 今村 正浩
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770765/
• 关键词: 放射線効果; 高LET放射線; 温熱; 細菌

1.細菌:放射線高抵抗性細菌(Deinococcus radiodurans MRI)の野性株(アデニン栄養要求突然変異株)を用い、50〜55℃の温度処理での細菌内DNAに損傷を検討した。2.加温処理:[2-3H]-adenine(15.5Ci/mmole;New England Nuclear)を標識後50〜55℃で加温し、加温時間は2時間まで行った。3.放射線照射:京都大学原子炉実験所において、低LET放射線として10kGyまでのγ線照射(線源:3.7×1014Bq.線量率:3.3kGy/hr)を行った。また高LET放射線としては、同実験所の原子炉(KUR)の重水(D_2O)タンク設備がある熱中性子照射筒実験室を用い、核反応断面積に大きい10B(H310BO3:90.2%,0.3M)を添加した細胞浮遊液に、熱中性子の照射(3×109n/cm2sec)を行い、10B(n,α)7Li反応で生じるBNCビーム(α粒子)を用いた。4.DNA抽出:細胞内のDNA抽出はフェノール抽出(Marmur method)で行なった。DNA溶解にはSSC(0.15M Nacl,0.015M sodium citrare,pH7.0)bufferを使用し、酸性加温に際してはこのbufferのpHを、3.0まで下げた。なお、抽出DNAの分子量は約10^7daltonsで、DNAの測定は吸光度254nmを用いた。5.DNA分子挙動の解析:細胞内DNA抽出後、スウィング型ロータを搭載した超遠心分離機を用いて5〜20%のアルカリ性蔗糖密度勾配超遠心法(35,000rpm for 4 hr at 5℃)で、DNAの鎖切断の状態を把握した。結果:220Gyのγ線照射で抽出DNAが低分子化した。この細菌の放射線高抵抗性はDNAが低分子化するための、この細菌の放射線高抵抗性はDNAの修復能の高さに起因していると推定した。また、中性緩衝液中、55℃、または、90℃の加温処理で抽出DNAの低分子化を認めなかったが、酸性環境下で同様の処理を行うと、顕著なDNAの低分子化を認めた。

1. Bacteria: high radiation-resistant bacteria (Deinococcus radiodurans MRI), wild strains (wild strains required for sudden infection), temperature of 50 ℃, 55 ℃, temperature of 50 ℃ and 55 ℃, DNA strains in the bacteria. two。 Heating treatment: [2-3H]-adenine (15.5ci