糖尿病患者血中糖化蛋白の大動脈平滑筋細胞におけるPGI_2産生・増殖に及ぼす影響

糖尿病患者血液中糖化蛋白对主动脉平滑肌细胞PGI_2产生和增殖的影响

• 批准号: 07770850
• 负责人: 藤本 良士
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770850/
• 关键词: 糖化蛋白; 血管平滑筋; プロスタグランディン; 糖尿病性血管症

[目的]糖化蛋白は糖尿病血管症の一因である。糖尿病患者や糖尿病実験動物において、血管壁や血管内皮細胞からの動脈硬化抑制因子であるPGI_2産生が抑制されている。本研究は血管平滑筋からのPGI_2産生におよぼす糖化蛋白の影響についての検討である。[方法]実験には、Rossらの方法に準じrat大動脈平滑筋細胞(VSMC)を、10%CS加DME培養液で継代培養した。VSMCを24穴プレートに2×10^6cell/wellずつ播き、各種ヒト血清を20%を含むDME1mlを添加し、12時間培養後、上清中のPGI_2の代謝産物である6ketoPGF_<1α>をした。PGI_2産生刺激物質として添加した血清は、(1)正常ヒト血清(Normal)、(2)ブドウ糖添加ヒト血清(+Glucose)、(3)化ヒト血清(Glycated)の3種類である。糖化ヒト血清は正常人より採取した血清にブドウ糖(500mg/dl)を添加し、37℃に7日間孵置して作成した。糖化以外の条件を一定にするため、正常ヒト血清も37℃に7日間静置し、ブドウ糖添加ヒト血清はこの正常ヒト血清にブドウ糖を最終培養直前に添加(500mg/dl)したものを用いた。[結果]1.VSMCからの6ketoPGF_<1α>産生は血清添加後上昇し、12時間でプラトーとなった。2.6ketoPGF_<1α>産生は添加血清の濃度依存性(10%〜50%)に増加した。3.6ketoPGF_<1α>産生をNormal serumとGlycated serum添加で比較すると、Normal 7554±1081pg/ml(mean±SEM、n=4)、Glycated 4598±394pg/mlとGlycated serum添加にて6ketoPGF_<1α>産生は39.1%低下した(p<0.05)。4.ブドウ糖添加血清との比較でも6ketoPGF_<1α>産生は、Glycated866.1±110.4pg/ml(mean±SEM、n=6)、+Glucose1674±122pg/mlと44.4±12.3%低下した(p<0.02)。[結論]VSMCからのPGI_2産生は血清中の糖化蛋白の増加により抑制されていた。PGI_2は血管平滑筋弛緩、血小板凝集抑制に作用する。今回の我々の結果は糖尿病における血栓形成傾向と血管合併症の関連を考える上で極めて興味深い。糖化蛋白の性格について、現在さらに検討中である。血管壁(内皮細胞)からのPGI_2産生は糖尿病患者血清と培養すると低下し、これは血糖と相関していることが知られる。今後、1.糖尿病患者血清をVSMCに添加し6ketoPGF1_α産生抑制とHbA_<1C>、フルクトサミン値の関係について。2.患者血清中のPGI_2産生抑制物質の分析を行う予定である。

[Objective] Glycated protein is one of the causes of diabetes mellitus. Diabetic patients and diabetic animals are also affected by the inhibition of PGI_2 production by vascular endothelial cells and vascular wall cells. This study investigated the effects of PGI_2 production on vascular smooth muscle cells and glycosylated proteins. [Methods] Rat vascular smooth muscle cells (VSMC) were cultured in 10% CS medium supplemented with DME. VSMC 24-cell culture medium 2× 10^6 cell/well culture medium, 20% serum containing DME1ml, 12-hour culture medium, PGI_2 metabolites in supernatant medium 6ketoPGF_<1α>. PGI_2 produces stimulants, which can be divided into three groups: (1) normal serum (Normal),(2) glucose serum (+Glucose), and (3) glycosylated serum. Glycation serum was prepared by adding glucose (500mg/dl) to normal human serum and incubating at 37℃ for 7 days. The normal serum was incubated at 37℃ for 7 days, then added to the normal serum at 500mg/dl for final culture. [Results] 1. VSMC produced 6ketoPGF_<1α> and increased after serum was added. 2.6 KetoPGF_<1α> production increased in concentration-dependent manner (10%~ 50%). 3. The production of 6ketoPGF_<1 α> was 39.1% lower than that of normal serum (mean±SEM, n=4) and Glycated serum (mean±SEM, n=4). 4. Compared with the serum supplemented with glucose, the production of 6ketoPGF_<1α>, Glycated 866.1 ±110.4pg/ml(mean±SEM, n=6),+Glucose1674± 122pg/ml decreased by 44.4±12.3%(p<0.02). [Conclusion] PGI_2 production by VSMC was inhibited by the increase of glycosylated protein in serum. PGI_2 plays an important role in vascular smooth muscle relaxation and platelet aggregation inhibition. The results of this study are as follows: diabetes mellitus, thrombosis tendency and vascular complications. Glycation protein character, now in the discussion. PGI_2 production in vascular wall (endothelial cells) is related to the decrease of serum glucose in diabetic patients. In the future, 1. The relationship between the inhibition of HbA_and the effect of VSMC on the production of 6ketoPGF1_α in diabetic patients<1C>2. The analysis of PGI_2 production inhibitor in serum of patients was carried out.