腎癌腫瘍内の微少発現遺伝子の検出法の開発--In situ RT-PCR法--

肾癌肿瘤微量表达基因检测方法的建立--原位RT-PCR法--

• 批准号: 07771329
• 负责人: 奥田 比佐志
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1996
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771329/
• 关键词: 腎細胞癌; 微少発現遺伝子; In situ RT-PCR法; カドヘリン

1.正常組織でのin situ PCR(1)正常組織においてβ-actin.mRNAやリボゾームmRNAの発現をノーザンブロットにて確認。→10例検体として用い、全例に発現が得られた。(2)確認された組織標本を用いてRT-PCR法を行いmRNAの発現を調べた。→10検体を用いて、β-actin,カドヘリン,C-mycのプローブ使用したところ、β-actin,カドヘリンは全例に発現を認めC-mycは3例にのみ発現を認めた。2.腎細胞癌手術摘出標本におけるin situ PCR(1)腎癌組織でβ-actin,リボゾームmRNAの発現をノーザンブロットにて確認→15検体全例に発現を確認した。(2)腎癌組織を用いてin situ RT-PCR法を行った。(15検体,grade1-5例,grade2-5例,grade3-5例)、プローブはβ-actin,カドヘリン,C-myc,を使用した。grade1-β-actin全例陽性,カドヘリン全例陽性,C-myc3例陽性,grade2-β-actin全例陽性,カドヘリン全例陽性,C-myc3例陽性,grade3-β-actin全例陽性,カドヘリン2例陽性,C-myc1例のみ陽性.(3)免疫染色-カドヘリン,C-mycに関して免疫染色を行った。grade1はin situ PCR法と同結果であった。grade2はカドヘリン4例,C-myc2例に陽性,grade3はカドヘリン1例,C-myc0例陽性であった。免疫染色よりRT-PCR法の方が検出感度にすぐれていた。3.今後、腎細胞癌手術摘出標本を用いてアポプトーシス関連のプローブを用いて、又、PyNPaseプローブを用いて、in situ RT-PCR法で検索していく予定。カドヘリンやC-mycとの相関、臨床的ファクターとの相関をみて検討していく予定である。

1. Normal tissue で の in situ PCR (1) normal tissue に お い て. Beta actin mRNA や リ ボ ゾ ー ム mRNA の 発 now を ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト に て confirmation. In 10 cases of 検 bodies, と て て was used with 検, and in all cases, に was presented with が and られた. (2) Confirm that された tissue specimens を were subjected to <s:1> てRT-PCR for <s:1> mRNA <s:1> occurrence を regulation べた by を て rT-PCR. - > 10 を 検 body with い て, beta actin, カ ド ヘ リ ン, C - myc の プ ロ ー ブ use し た と こ ろ, beta actin, カ ド ヘ リ ン は all cases に 発 を now recognize め C - myc は 3 cases に の み 発 を now recognize め た. 2. Pick the renal cell carcinoma surgery specimens に お け る in situ PCR (1) the kidney tissue で beta actin, リ ボ ゾ ー ム mRNA の 発 now を ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト に て confirmation - > 15 検 body all cases に 発 を now confirm し た. (2) Renal cancer tissues を were performed った by を in situ RT-PCR. (15 検 body, grade1-5 cases, grade2-5 cases, grade3-5 cases), プ ロ ー ブ は beta actin, カ ド ヘ リ ン, C - myc, を use し た. Grade1 - beta actin positive cases, all カ ド ヘ リ ン all positive cases, C - myc3 cases positive, grade2 - beta actin positive cases, all カ ド ヘ リ ン all positive cases, C - myc3 cases positive, grade3 - beta actin positive cases, all カ ド ヘ リ ン positive in 2 cases, C - myc1 example の み positive. ( 3) Immunostaining -カドヘリ,C-mycに gate て immunostaining を line った. grade1 in situ PCR と the same result as であった. Grade2 は カ ド ヘ リ ン 4 cases, C - myc2 に positive, grade3 は カ ド ヘ リ ン in 1 case, C - myc0 cases positive で あ っ た. Immunostaining よ が検 and RT-PCR method が検 yield sensitivity にすぐれて た た. 3. In the future, pick the renal cell carcinoma surgery specimens を with い て ア ポ プ ト ー シ ス masato even の プ ロ ー ブ を with い て, again, PyNPase プ ロ ー ブ を with い て, the in situ rt-pcr method で 検 cable し て い く to decide. カ ド ヘ リ ン や C - myc と の phase masato, clinical フ ァ ク タ ー と の phase masato を み て beg し 検 て い く designated で あ る.