内耳における炭酸脱水化酵素の局在およびその役割について

碳酸酐酶在内耳的定位及其作用

• 批准号: 07771463
• 负责人: 岡村 洋沖
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771463/
• 关键词: 炭酸脱水酵素; 酵素組織化学; 酵素活性; 内耳; 固定方法; 脱灰方法

内耳における炭酸脱水酵素(CA)の正確な局在の決定には酵素活性の保存と組織構造の保持という矛盾した課題の克服を必要とする。この課題を解決するため固定や脱灰が、酵素活性や組織構造の保持、CA活性の局在にどのような影響を及ぼすかについて検討した。そして、この結果を基に内耳におけるCA局在を調べた。モルモット側頭骨を対象にCAの総窒素量に対する比活性を求め、残留窒素量を比較した。その結果、無固定無脱灰、10日間放置によりCAは約70%が失活し、脱灰を加えると約90%失活し、組織構造の保存も極めて悪かった。固定により活性は対照の3-5%まで減少したが、固定法の相違による失活の著しい差異は認められなかった。また、いづれの固定法でも組織構造は保存されたが、全身+蝸牛灌流固定で最も良好な形態保存が得られた。EDTAとPLANK-RYCHLO氏液による脱灰で、活性が比較的保持されたが、トリクロル酢酸では著しく失活した。この結果、内耳CA組織化学には、組織構造と活性保持の点から、全身+蝸牛灌流固定法とEDTAによる脱灰が良好な結果を与えると結論された。以上の結果を基に、モルモット内耳におけるCA活性の局在を調べた。コルチ器では内有毛細胞、外有毛細胞蓋板、神経終末、内指節細胞、ダイテルス細胞に、血管条では血管と密接な位置関係を有する中央帯にその局在を認めた。ベッチャー細胞やラセン神経節の核、ラセン靱帯とVasculo-epithelialzoneの線維芽細胞にも局在を認めた。この結果は、これまでの報告とおおよそ一致していたが、相違点も認められた。これは、上述の固定法および脱灰法によりCAの失活や拡散もなく、組織構造が保持されたためと考えた。この結果は内外リンパの産生や吸収、内外リンパと内耳組織のイオン交換を考える上で意義ある結果を示した。

The determination of the correct position of carbonic acid dehydratase (CA) in the inner ear, the preservation of enzyme activity and the maintenance of tissue structure are essential problems to overcome. This problem is solved by fixing, deashing, enzyme activity, tissue structure maintenance, CA activity and its influence. The result is that the inner ear The amount of CA in the skull was compared with the specific activity. Results, no fixation, no deashing, 10 days of storage, CA ~ 70% inactivation, deashing, ca ~ 90% inactivation, tissue structure preservation 3-5% decrease in activity, 3-5% decrease in inactivation, 3 - 5% decrease in activity, 3 - 5% decrease in inactivation The best preservation of tissue structure was obtained by fixation with whole body and snail perfusion. EDTA PLANK-RYCHLO solution is used to remove ash, maintain activity, and inactivate organic acids. Results: The histochemistry of the inner ear, tissue structure, activity retention, whole body + snail perfusion fixation method, good results and conclusions The above results show that CA activity is regulated in the inner ear. The inner hair cells, outer hair cells, nerve terminals, inner knuckle cells, blood vessel strips, and blood vessel close connections are located in the center of the organ. The nuclear, nuclear and vascular cells in the Vasculo-epithelial zone are recognized in the cell cycle. The result is that the report is consistent with the report. The above methods of immobilization and deashing are used to inactivate CA and to maintain tissue structure. The results of this study are as follows: internal and external separation, internal and external separation.