p53欠失マウス初代培養肝細胞を用いたCyp3aの発現制御機構の解析

p53缺陷型小鼠原代培养肝细胞分析Cyp3a表达控制机制

• 批准号: 07857165
• 负责人: 中山 佳都夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857165/
• 关键词: p53; P450; CYP; 転写調節; ノックアウトマウス; 初代培養肝細胞

Cyp3a-11遺伝子の-3kbまでの5′-上流配列をルシフェラーゼ遺伝子に融合し、キメラレポータープラスミドを作製した。これをp53欠失マウスの初代培養肝細胞に導入し、細胞抽出物のルシフェラーゼ活性を測定したところ、明白な転写活性を示した。そこで、Cyp3a-11遺伝子の5′側から順次削っていった欠失変異体を作製し、同様にp53欠失マウスの初代培養肝細胞に導入して転写活性を測定した。その結果、Cyp3a-11遺伝子の5′-上流-265から-161の間および-49から-24の間に転写調節領域を同定した。-49から-24の領域には基本的な転写活性に必要な配列であるTATAboxとGCboxが存在していた。次に、-265から-161の転写活性化領域に注目し、この配列に結合する転写調節因子が存在するかゲルシフトアッセイ法により解析した。その結果、p53欠失マウスの肝核抽出液を用いたゲルシフトアッセイでは、3本のバンドが検出され、この領域に結合するタンパク因子が存在することが明らかとなった。タンパク因子がこの領域中のどの配列に特異的に結合して、これら3本のバンドが生じたかについて現在検討中である。

Cyp3a-11 gene-3kb sequence of 5′-upstream alignment of the gene fusion, selection and selection The p53 gene was introduced into primary cultured hepatocytes, and the cell extracts were assayed for p53 gene activity. The 5′-side of Cyp3a-11 gene was sequentially cut down to determine the expression activity of p53 gene in primary cultured hepatocytes. As a result, Cyp3a-11 gene 5′-upstream-265-161-49-24-25-24-2- 49-24 Next,-265 to-161 of the active field of attention, the allocation of the combination of the write adjustment factor exists, the analysis of the method The results showed that the p53 deficiency in the liver extract was due to the presence of a factor in the liver extract, which was due to the presence of a factor in the liver extract. In this case, it is necessary to combine the factors in the field with the specific factors in the field, and to discuss the factors in the field.