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魚臭症候群の原因の解明と遺伝子治療を目指して

旨在阐明鱼臭综合症的病因并开发基因疗法

基本信息

批准号：
11771419
负责人：
中山佳都夫
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

フラビン含有モノオキシゲナーゼ(FMO)のノックアウトマウスの作製のため、マウスの遺伝子より、遺伝子ライブラリーのスクリーニングあるいは、ロングディスタンスPCRを行って、FMO1、FMO3およびFMO5の遺伝子を単離した。このうち、ヒトにおいてはFMO3が魚臭症候群の原因となる物質、トリメチルアミンの酸化的代謝反応に主要にかかわり、本酵素活性の遺伝的な欠損が魚臭症候群の原因である可能性が提唱されているため、本年度はFMO3遺伝子に焦点を絞り、FMO3遺伝子をノックアウトするためのターゲッティングベクターの構築を行った。FMOの場合、第2エクソンにコードされている領域に酵素活性発現のために必須なFADの結合ドメインを含んでいるため、第2エクソンをつぶすことによりFMO活性を完全に欠失させることができると考えられる。そこで、FMO3遺伝子の第2エクソンの部分に、翻訳領域をつぶし同時に発現を調べることができるようにLacZ遺伝子をノックインした。また、ポジティブ選別のためにneo耐性遺伝子をLacZの下流に連結した。これらはLacZ遺伝子のATG周りの塩基配列をPCRで改変し、インフレームで挿入されるように設計した。最終的にネガティブ選別のためにジフテリア毒素Aフラグメント(DT-A)遺伝子を組み込んでターゲッティングベクターとした。以後、マウスのES細胞に作製したターゲッティングベクターを導入し、組み換えを行って選別を行ない、相同組換え体を解析後、マウス胚に注入し、仮親の子宮に移植してキメラマウスを出産させる。

フラビンcontains モノオキシゲナーゼ(FMO)のノックアウトマMade by ウスののため、マウスの伝子より、弝子ライブラリーのスクリーニングあるいは、ロングディスタンスPCRを行って、FMO1、FMO3およびFMO5の伝子を単里した.このうち, ヒトにおいてはFMO3がfish odor syndrome cause となるsubstance, トリメチルアThe metabolic reaction of acidification is mainly due to the loss of enzyme activity and fish odor syndrome. The reason is the possibility of singing the song, and this year's FMO3 legacy is the focus of the year, F MO3 缝子をノックアウトするためのターゲッティングベクターのconstruction を行った. In the case of FMO, the second field of enzyme activity must be combined with FAD With んでいるため, 2nd エクソンをつぶすことによりFM O activity is completely lost and the activity is completely lost.そこで, FMO3 伝子の二エクソンのpartに, 訳区をつぶし Same时に発appearsを动べることができるようにLacZ伝子をノックインした.また、ポジティブ选选のためにneo patient remaining 伝子をLacZ の indecent connection した.これらはLacZ 伝子のATGweekりの塩综合をPCRで椉し、インフレームでINSERT されるようにDesignした. The final にネガティブselected のためにジフテリアtoxic poison Aフラグメント( DT-A) 伝子を组み込んでターゲッティングベクターとした. From now on, the ES cells will be produced and imported, and the group will be changed and the rows will be selected. After analyzing the body of the same group, the embryo was injected into the embryo, and the uterus was transplanted into the uterus and the embryo was produced.