ドーパミン作動性神経細胞の発生・分化・生存維持に対する神経栄養因子の機能

神经营养因子在多巴胺能神经元发育、分化和维持存活中的功能

• 批准号: 07858088
• 负责人: 松下 夏樹
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07858088/
• 关键词: ドーパミン細胞; 神経栄養因子; グリア細胞由来神経栄養因子; 遺伝子構造

新生マウスの全脳よりmRNAを調製し、既報のラットGDNF cDNAの配列をもとに合成したプライマーを用いて、RT-PCR法によりマウスのグリア細胞由来神経栄養因子(GDNF)cDNAを取得した。取得したcDNAより推定されるマウスGDNFのアミノ酸配列をラット及びヒトGDNFのアミノ酸配列と比較したところ、3者間で高い相同性を示した。特にマウスとラットではアミノ酸2残基が異なるだけであった。次にマウスGDNF cDNAをプローブにしてマウス遺伝子ライブラリーをスクリーニングし、GDNFをコードする領域をすべて含む全長約50kbの遺伝子クローンを取得した。構造解析の結果、マウスGDNF遺伝子は2つのエクソンから成り、イントロンは約18kbであることを明らかにした。更にマウスGDNF遺伝子の転写開始点上流約7kbの全塩基配列を決定した。転写開始点付近にはTATA boxが存在し、これに隣接してSplが結合すると推測されるGC boxが存在した。またマウスGDNF遺伝子の5'上流領域には、転写調節因子APlが結合することで知られるTREコンセンサス配列(TGACTCA)が存在した。マウス脳では大きさの異なる2種のGDNF mRNAが存在することが認められ、小さなタイプのmRNAは、大きなタイプのmRNAのうち第1エクソン内の78塩基が欠失した形で存在した。これはスプライシングの5'donor siteが2カ所存在するためスプライシングの違いによって2つのタイプが存在するものと推測された。またRT-PCRによってGDNF mRNAは少なくともマウス胎生期85日目には発現していることが認められた。一方、ラットグリオーマ由来細胞株C6細胞においてGDNF遺伝子発現がTPA処理によって誘導されることが観察された。GDNF欠損マウス作製のため、GDNF遺伝子内にネオマイシン耐性構造遺伝子を挿入したターゲティングベクターを構築し、これをES細胞に導入して相同組み換え細胞を選択した。現在キメラマウスを作製中である。

The gene expression of GDNF was synthesized by RT-PCR. The sequence of GDNF was analyzed and compared. Special acid residues The GDNF cDNA library contains a 50kb cDNA library. As a result of structural analysis, the GDNF gene is about 18kb long. In addition, the GDNF gene is about 7kb upstream of the start point of the full base sequence. TATA box exists near the start point of writing, and GC box exists near the start point of writing. The 5'upstream domain of the GDNF gene is associated with the TRE gene sequence (TGACTCA). There are two kinds of GDNF mRNA in the first part of the gene, namely, GDNF mRNA in the first part of the gene. The 5'-donor site of this project exists only in the case of the 5'-donor site. RT-PCR detects GDNF mRNA at day 85 of gestation. The expression of GDNF gene was detected in C6 cells treated with TPA. GDNF gene is introduced into ES cells and the same group of ES cells is selected. Now, we're in the middle of something.