Alport症候群のモデルマウスの作成および遺伝子治療法の開発

阿尔波特综合征小鼠模型的建立及基因治疗方法的开发

• 批准号: 08557052
• 负责人: 内山 聖
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08557052/
• 关键词: Alport症候群; COL4a4; ノックアウトマウス; 遺伝子治療; アデノウイルスベクター; COL4a5; アデノウイルス; COL4a3

マウスCOL4a4のゲノム遺伝子において、NCドメイン部分を含む約3.5kbの断片を取り除き、この部分にneo遺伝子を組み込んだターゲテイングベクターを用いてジーンターゲティング法によりOL4a4ノックアウトマウスを作成した。NCドメインを含むcDNA断片を用いNorthern blotを行ったところ、ノックアウトマウス腎では、COL4a4の発現は認められず、NCドメインはノックアウトされていることが確認された。6種類のIV型コラーゲンα鎖のモノクロナール抗体を用いた免疫組織化学では、IV型コラーゲンα鎖4のみならず、IV型コラーゲンα鎖3および5も全く検出されなかった。また、IV型コラーゲンα鎖1および2は、コントロールでは主に糸球体のメサンギウム基質に限局して染まるのに対し、ノックアウトマウスでは染色範囲が拡大し、基底膜も明瞭に染まった。臨床症状は、血尿、蛋白尿が認められ、血中尿素窒素、クレアチニンは、生後10週頃より急激に増加し、大部分のノックアウトマウスは、生後13-16週頃に腎不全により死亡した。光顕および電顕所見もヒトAlport症候群の組織像と一致した。以上の解析より、本ノックアウトマウスは、ヒトAlport症候群のモデル動物に成り得るものと考えられた。本ノックアウトマウスを用いて遺伝子治療の可能性を検討した。CAGプロモーターを有するアデノウイルスペクターカセットpAxCAwtに全長のCOL4a4cDNAを挿入したコスミドpAxCOL4a4を用いてCOS-TPC法により組換えアデノウイルスを作成し、腎動脈に注入した。免疫染色では、IV型コラーゲンα鎖4が弱く染まる糸球体が少数認められたが、病理組織所見および尿所見では、遺伝子導入による有意な改善は認められなかった。糸球体に効率良く遺伝子導入する新しい方法の開発が必要と考えられた。

The COL4a4 must have a file containing about 3.5kb fragments. The file contains a file containing about 3.5kb fragments. The file contains a file containing about 3.5kb fragments. The file contains about 3.5kb fragments. NC code contains cDNA fragments. Northern blot is used to confirm the presence of COL4a4. Immunohistochemistry of 6 types of type IV antibodies was used. Type IV antibodies were used in 4 types of antibodies. Type IV antibodies were used in 3 types of antibodies. Type IV: α-lock 1 - 2, α-lock 3 - 4, α-lock 4 - 4, α-lock 4, α-lock 4, α- Clinical symptoms include hematuria, proteinuria, urinary urea, urinary urea. The histological features of Alport syndrome are consistent with those observed in light and electricity. The above analysis shows that the disease is caused by Alport syndrome. This article discusses the possibility of using the gene therapy. CAG has been used to construct and inject the full-length COL4a 4 cDNA into the renal artery using COS-TPC. Immunostaining, type IV, alpha 4, weak staining, small number of spheroids, pathological findings, urinary findings, genetic introduction, intentional improvement, reverse recognition It is necessary to develop a new method for the introduction of spherical particles.