セルソーターを用いる微生物の属・種、機能に特異的な効率的スクリーニング法の開発

使用细胞分选仪开发针对微生物属/种和功能的有效筛选方法

• 批准号: 08650944
• 负责人: 桂樹 徹
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08650944/
• 关键词: スクリーニング; サイトメトリー; セルソーター; チアミン; ゲルマイクロドロップ

[目的]微生物のスクリーニングでは土壌などのサンプルから目的の微生物を集積、選択培養してから、適当な方法によってコロニーなどの形で単離するが、培養に時間がかかり、また効率的でもない。そこで、細胞を効率良く検出、分離できるセルソーターの技術(フローサイトメトリー)を利用することを企画した。実験モデルとして、チアミンを著量生成するパン酵母の改良、大腸菌の特定の菌株の検出、を採り上げる。[方法と結果、総括]酵母では、酵母菌体をそのままアルカリ条件下、赤血塩と反応させ、菌体内のチアミンを蛍光物質チオクロームに導き、これをプローブとして個々の細胞をサイトメトリー解析した。しかし、大多数の細胞が死んだ。酵母を生かして得るためにゲルマイクロドロップ(GMD)法により一旦マイクロクローンにすることにした。すなわち、細胞を融解寒天に懸濁し、W/O型エマルションにしてから固化させてGMDとし、短時間の培養を行なった。このクローンをGMDのままで反応させてチオクロームを生成させた。マイクロクローン化の条件、反応条件を検討したが、今のところGMDの中の細胞の生存率、チオクロームの生成率はともに不安定である。大腸菌では、K-1株を認識する市販のマウス抗体IgMを利用し、市販の蛍光標識ラット抗マウスIgM抗体を二次抗体とする方法によった。この蛍光抗体を大腸菌のK-1株、K-12株、C600株との混合懸濁液に反応させ、この方法によりK-1株のみを分離し得た。別のグループが大腸菌O-157:H7株をそれに対する市販の蛍光(一次)抗体を利用してフローサイトメトリーにより検出したと報告したが、今回得た結果はその方法よりは煩雑であったが、任意のプローブを作成して利用できる長所を実証した。

[objective] the microorganism is used to collect microorganisms, select the microbe, and use the appropriate method to determine the temperature of the microbe, the time and the rate of the microbe. The rate of production and distribution is good, and the separation is based on the use of technology and technology. The production of yeast was improved, the specific strains of large bacteria were isolated, and the samples were collected. [methods] under the condition of yeast culture and yeast cell culture, the red blood cell culture was reversed, the bacteria were tested in vivo, and the two cell cultures were analyzed. Most of the cells are dead. The yeast was used to treat yeast in the first place. The GMD method was used to treat the yeast in the first place. In cold weather, cold weather and cold weather. I don't know. I don't know. The condition, the inverse condition, the cell survival rate, the generation rate and the instability rate in the current GMD. Agrobacterium tumefaciens and Kmuri 1 strain were used to identify the antibody IgM, and the market marker was used to identify the secondary antibody against anti-IgM antibody. One strain of Kmurl, 12 strains of Kmure and C600 strains of E. coli were isolated and purified. In addition, the anti-bacterial O-157:H7 strain was detected in the market. The antibody was used to determine the accuracy of the report. This time, the results show that the method is effective, and the results show that the results show that the anti-virus antibody (one-time) antibody can be used to make use of the health care system.