ウシ初期胚における発生ステージ特異的遺伝子の探索

寻找早期牛胚胎中发育阶段特异性基因

• 批准号: 08660350
• 负责人: 岩崎 説雄
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660350/
• 关键词: ウシ初期胚; 遺伝子発現; 体外受精; PCR

各発生ステージ特異的に発現する遺伝子断片の探索を行うことを目的として、マウス胚および肝臓を用いたDifferential display(DD)の条件検討を行うと共に、体外受精により作出したウシ胚より、RNAの抽出、cDNAの合成、PCRによる増幅とゲル電気泳動によるDNA断片の分離・解析を行い、以下の結果を得た。1.マウス胚および肝臓を用いたDifferential display(DD)の条件検討逆転写(RT)-PCRにより、マウス初期胚と肝臓ならびにウシ初期胚の全てのステージにおいてβ-アクチン断片(267bp)の増幅がみられ、cDNAの合成が確認された。次に、マウスの肝臓のcDNAを用いてDDに用いるプライマーの選抜を行いDDを行った。その結果、マウス初期胚(2細胞期〜胚盤胞期、内細胞塊(ICM)、栄養外胚葉(TE)において、2〜4細胞期にのみ発現し8細胞期以降に消失するDNA断片(580bp)と、逆に8細胞期以降にのみ発現したDNA断片(450bp、790bp)が認められた。さらに、胚盤胞期胚、ICM、TEを比較した結果、胚盤胞期胚とICMに発現した共通の断片(950bp)が存在し、逆にTEにのみ発現した断片(400bp)が存在した。2.ウシ初期胚の遺伝子発現におけるステージ特異性ウシ初期胚(2細胞期〜胚盤胞期、ICM、TE)では、2細胞期に存在し5細胞期以降に消失するDNA断片(670bp)が存在し、逆に、5細胞期以降に出現するDNA断片(750bp)が存在した。また、8細胞期〜胚盤胞期で発現した断片(1.5kb、2.0kb)と、2細胞期の正常胚にのみ発現し、停止胚で欠損していた断片(180bp、340bp)も確認された。ICMとTEの比較では、TEにのみ発現した断片(340bp、550bp)が確認された。今後、これら発生ステージ特異的に発現したDNA断片のクローニングを行い、シークエンスを行う予定である。

The following results were obtained from the study of the conditions for Differential display(DD), in vitro fertilization (IVF), RNA extraction, cDNA synthesis, PCR amplification, and electroporation. 1. Differential display(DD) condition analysis and reverse transcription (RT)-PCR analysis of the complete sequence of cDNA fragments (267bp). The cDNA of the liver is used in the selection of DNA. DNA fragments (580bp) and DNA fragments (450bp, 790bp) were identified in the early embryo stage (2-cell stage to blastoderm stage, ICM, TE), 2 - 4-cell stage to 8-cell stage. The results showed that there was a common fragment (950bp) in blastoderm embryo, ICM and TE, and there was a common fragment (400bp) in TE. 2. DNA fragment (670bp) existed in early embryo (2-cell stage ~ blastoderm stage, ICM, TE) and disappeared in 5-cell stage. DNA fragment (750bp) existed in early embryo (2-cell stage ~ blastoderm stage, ICM, TE) and disappeared in 5-cell stage. Fragments (1.5kb, 2.0kb) were detected from 8-cell stage to blastoderm stage, fragments (180bp, 340bp) were detected from normal embryos at 2-cell stage, and fragments (180bp, 340bp) were detected from stopped embryos. Comparison of ICM and TE fragments (340bp, 550bp) was confirmed. In the future, the development of unique DNA fragments will be carried out in a predetermined manner.