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肝細胞膜におけるカフェイン惹起クロライド電流の単一チャネルレベル解析

咖啡因诱导的肝细胞膜氯电流的单通道水平分析

基本信息

批准号：
08670058
负责人：
山下由朗
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

以前の研究でホールセル・パッチクランプしたラット単離肝細胞にカフェインを細胞外投与すると、コンダクタンス増大を伴う持続性Cl電流の発生することを明らかにした。このカフェイン惹起Cl電流は、細胞内情報伝達系やGTP結合蛋白を介さずにカフェインのClチャネルへの直接開孔作用によって生じることが示唆された。今回の目的は、excisedパッチ法による単一チャネルレベル解析法にて、このことを直接証明することであった。カフェインは細胞膜を容易に通過できるのでexcised inside-outパッチ法を用い、細胞内膜面側にカフェイン含有NaCl(又はKCl)溶液を与えた。しかしながら、多数回の試行にもかかわらず、カフェイン投与によって開くチャネル電流は観察できなかった。細胞内膜面側溶液にMgやグルコースなどを加えても見い出せなかった。何か未知の細胞内因子がClチャネル電流発生に不可欠という可能性も残るため、cell-attach法でも試みたが、カフェイン惹起チャネル電流は観察できなかった。原因として、チャネル電流の検出不可能な程チャネルコンダクタンスの小さいことが考えられた。こうした研究経過の中で、逆にカフェイン投与で閉じるチャネル電流が見い出されたので報告します。excised inside-outパッチ法を使用し、膜内外液は120mM NaCl、1mM CaCl_2と相同にした。無カフェイン液では、当該チャネルは100%近く開いた状態であるが、カフェイン投与で濃度依存性に開確率を抑制した(30mMでは開確率を60%に減少)。電流振幅は電位依存性を示さず、単一チャネルコンダクタンスは約20pSであった。液組成交換による逆転電位等の変化より、カフェインで閉じるチャネルは、カルシウム感受性の非選択性カチオンチャネルであることが示唆された。

Previous studies have shown that the generation of Cl currents in isolated hepatocytes is accompanied by an increase in Cl currents. This phenomenon causes Cl currents, intracellular signaling, GTP binding proteins, and direct pore opening of Cl molecules. The purpose of this paper is to directly prove the existence of a new method of analysis. The cell membrane is easy to pass through, and the cell membrane contains NaCl(KCl) solution. Most of the time, the trial will be held. Cell membrane side solution What is the unknown intracellular factor? Cl ~(2 +)~( The reason for this is that it is impossible to detect the current in the circuit. The study was conducted in the middle of the year and the study was conducted in the middle of the year. Excited inside-out method was used. The solution inside and outside the membrane was 120mM NaCl and 1mM CaCl_2. When the solution is not available, the yield is 100% close to the open state, and the yield is inhibited depending on the concentration of the solution (30mM decreases the yield by 60%). The dependence of the current amplitude on the potential is shown, and a single pulse width is approximately 20pS. Liquid composition exchange, reverse potential, etc., change, change, change