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心筋遅延整流Kチャネルの膜伸展受容性に関する単一チャネル解析

心肌延迟整流K通道膜牵张感受性的单通道分析

基本信息

批准号：
08670048
负责人：
光家保
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670048/
关键词：
心室筋細胞遅延整流Kチャネル膜伸展

项目摘要

モルモット心室筋細胞を単離し、これにパッチクランプ法を適用して膜イオンチャネル電流を記録した。まず、遅延整流K電流を細胞全膜電流記録した。細胞膜の伸展を加えるため、低浸透圧溶液を与えた。前後で、イオン濃度が変化することを避ける目的で、標準浸透圧溶液としては、NaClを70%量含む溶液にマンニトールを加え、補正したものを使った。細胞の外液を正常浸透圧液から70%浸透圧溶液に置き換えると、1秒の脱分極パルスで活性化する遅延整流K電流が最大2倍の大きさに活性化された。その際、電流活性化の電位依存性や電流活性化の時間経過に明らかな変化を認めることは出来なかった。さらに、脱分極を30秒に延長して、電流の膜電位依存性活性化が飽和した時点で、低浸透圧液を与えても、電流の振幅が増大した。同様な遅延整流K電流振幅の増大は、パッチ電極内に圧を加え、細胞内に細胞内溶液を注入し、細胞を膨張させた場合にも観察された。このような所見に基づいて、細胞膜の伸展は活性化できる遅延整流Kチャネルの総数を増大することに電流振幅を大きくすると結論した。そこで、単一チャネル電流の記録を試みた。通常の先端内径のパッチクランプ電極では脱分極によるチャネルの活性化を記録することはできなかった。そこで、電極先端を5ミクロン以上に大きくした電極を使うことを試みた。細胞に電極先端を軽く当ててもこの大きな電極ではギガシールを得ることはできなかったが、電極に陽圧を加えた状態で、細胞にできるだけ圧着し、急速に陰圧に切り替えると、ギガシールを得ることができた。そこで、脱分極パルスを与えると、まれに1秒パルスの後半で、開時間の長い外向きチャネル電流を記録することができた。チャネルのコンダクタンスは約20-30pSであった。アンサンブル平均で、脱分極パルス中電流のゆっくりとした活性化を確認できた。このチャネルの開閉動態や、細胞膜伸展の効果を調べることを試みているが、依存として、チャネル記録に成功することが希で、成功していない。細胞全膜電流の記録の実験結果はCirculation Researchに報告することができた。

The method of separating and separating ventricular muscle cells from each other is applicable to the recording of cell currents. The whole membrane current of the cell was recorded. Cell membrane stretch and low osmotic pressure solution Before and after, the concentration is changed to avoid the purpose, the standard infiltration pressure solution is changed to 70% of the solution, the correction is changed to 70% of the solution. The cell's external fluid is activated at a maximum of 2 times the normal saturation pressure solution from 70% saturation pressure solution for 1 second. Potential dependence of current activation and time lapse of current activation The time of depolarization and depolarization is prolonged for 30 seconds, the membrane potential-dependent activation of the current is saturated, and the amplitude of the current is increased at low saturation pressure. The increase of the amplitude of the delay rectifier K current, the increase of the voltage in the electrode, the injection of the intracellular solution into the cell, and the expansion of the cell are observed. The results showed that the cell membrane extension was activated, the number of cells increased, and the current amplitude increased. The record of the current is recorded in the record. Usually, the tip diameter of the electrode is different from the polarization of the electrode. The electrode tip is 5 times larger than the electrode tip. The cell electrode tip is in a state of increasing voltage, the cell electrode tip is in a state of increasing voltage, the cell electrode tip is in a state of increasing voltage, and the cell electrode tip is in a state of increasing voltage. The first half of the time, the second half of the time, the third half of the time The temperature of the fish is about 20-30pS. The current in the polarization process is confirmed. The open/close dynamics of the cell cycle and the effect of cell membrane extension are modulated. The results of whole-membrane current recording are reported in Circulation Research.