スライス・パッチクランプ法による視床下部ニューロンのシナプス入力特性

切片膜片钳法研究下丘脑神经元的突触输入特征

• 批准号: 08670087
• 负责人: 稲永 清敏
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670087/
• 关键词: 視床下部; 視索上核; パッチ・クランプ; シナプス; グルタミン酸; GABA; カルシウム依存性; EPSC

5-7週令の雄性ICRマウスをケタラール深麻酔後、300μmの脳スライス標本を作成した。さらに、小さくトリミングし、視索上核とその周辺部のみを含む切片にした。ホールセルクランプ記録法により膜電位固定下で視索上核ニューロンの興奮性シナプス後電流(EPSC)および抑制性シナプス後電流(IPSC)を記録した。膜電位依存性シナプス後電流を誘起するためにfocal刺激あるいは高KCl(21mM)を用いた。また、膜電流固定下で興奮性シナプス後電位(EPSP)を記録した。得られた電流および電位はPCMデータレコーダに収録し、オフラインによりPCLAMPで解析した。興奮性シナプス電流(EPSC)はグルタミン酸受容体拮抗剤であるキヌレン酸(1mM)により、抑制性シナプス電流(IPSC)はGABA受容体拮抗剤であるピクロトキシン(50μM)あるいはビククリン(3-10μM)により抑制された。EPSCは膜電位依存性および自発性EPSC(微小EPSCを含む)に分類された。無カルシウム潅流液下で、膜電位依存性EPSCは消失したが、自発性EPSCは影響を受けなかった。以上より、(1)視索上核ニューロンに対して興奮性神経伝達物質としては主にグルタミン酸が、また抑制性神経伝達物質としてはGABAが作用していること、(2)視索上核ニューロンの活動は自発性に放出されるグルタミン酸により絶えず調節されていること、(3)自発性グルタミン酸放出は細胞外カルシウム濃度に依存しないことが分かった。従来、シナプス入力を遮断する目的で無Ca/高Mg潅流液が用いられてきたが、本実験結果によりこの方法は必ずしも適当でないということが示唆された。視床下部の神経終末からの伝達物質の放出において、膜電位依存性および自発性放出があり、これらは異なった機構によっていることが推測される。

At 5-7 weeks old, the male ICR マウスをケタラール is deeply anesthetized, and a 300 μm の脳スライス specimen is prepared.さらに, small さくトリミングし, supraoptic nucleus とそのperipheral embroidery part のみを怀section にした.ホールセルクランプ recording method により The excitability of the supraoptic nucleus under fixed membrane potential シナプスPostcurrent(EPSC)およびInhibitory シナプスPostcurrent(IPSC)をRecordした. Membrane Potential Dependence: After the current is induced, the focal stimulus is stimulated by high KCl (21mM). The excitatory back potential (EPSP) was recorded under a fixed membrane current. Get the られたcurrent and およびpotentialはPCMデータレコーダにcollectionし, and the オフラインによりPCLAMPでanalyticsした. Excitatory シナプス current (EPSC) はグルタミン acid receptor antagonist シであるキヌレン acid (1mM) により, inhibitory シナプス current (I PSC) GABA receptor antagonist であるピクロトキシン (50μM) あるいはビククリン (3-10μM) and により inhibit された. EPSC is classified into membrane potential-dependent and autogenic EPSC (micro-EPSC). There is no leakage under the liquid, the membrane potential-dependent EPSC is not lost, and the self-reducing EPSC is not affected. Above, (1) Supraoptic nucleus ニューロンに対してExcitatory God 経伝达MAT としては主にグルタミン acid が, ま た inhibitory nervous system substance と し て は GABA が し て い る こ と, (2) on the visual cord Nuclear ニューロンのactivity は自発性にrelease されるグルタミン acid によりえずregulation されていること, (3) The release of self-reducing chloroquine acid depends on the concentration of extracellular chloroquine.従来, シナプス入力を无码不卡/无码/高Mg潅fluid が用いられてきたが、The result of this 実験 is that the method is necessary and the method is appropriate. The lower part of the optic bed, the final discharge of the substance, the membrane potential dependence, The nature of the self-disease releases があり, and the これらはdifferent なったorganism によっていることが speculates される.