血管内皮細胞増殖因子(VEGF)による血管透過性亢進作用の機序-血管内皮細胞を用いた研究-

血管内皮生长因子（VEGF）诱导血管通透性增强的机制 -利用血管内皮细胞的研究-

• 批准号: 08670122
• 负责人: 入江 かをる
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670122/
• 关键词: ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC); 血管内皮細胞増殖因子(VEGF); 誘導型一酸化窒素合成酵素(iNOS); 塩基性アミノ酸トランスポーター(CAT); 腫瘍壊死因子(TNF-α); エンドトキシン(LPS); アルギニン; 逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)

〔目的〕申請者らは、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)によるマウス皮膚の血管透過性亢進作用に内因性一酸化窒素(NO)が関与することを報告した(第92回日本薬理学会関東部会発表;1995年)。本研究ではVEGFの作用機序の解明を目的として、誘導型NO合成酵素(iNOS)および塩基性アミノ酸トランスポーター(CAT)のup regulationが含まれる可能性について、血管内皮細胞およびマウス皮膚を用いて検討した。CATはNOSの基質であるアルギニンの細胞内への取り込みに関与し、誘導型のCAT-2は、血管平滑筋細胞をサイトカインにより刺激すると、iNOS等と共に共誘導されることが最近報告されている。〔方法〕ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を用いた。HUVECは常法により培養し、サブコンフルエント時に、VEGF1〜30ng/mlを0.5〜4時間作用させた。比較として腫瘍壊死因子(TNF-α)についても調べた。薬物処理後、総RNAを抽出し、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)にてiNOSおよびCAT-2の遺伝子発現について調べた。マウス皮膚については、VEGF1〜10ng/site皮下注射1〜2時間後の注射部位皮膚の総RNAを抽出後、同様にiNOSのRT-PCRを行った。VEGFの比較としてエンドトキシン(LPS)400μg/site s.c.2時間について調べた。〔結果〕(血管内皮細胞)CAT-2については、TNF-α1〜30ng/mlの1〜24時間処置によりmRNAレベルの有意な増加が認められた。VEGF処置の影響については現在研究中である。(マウス皮膚)マウス皮膚のiNOSmRNAレベルは、LPSにより増加が認められ、VEGFでは増加傾向が認められたが、再現性等について研究中である。

[目的]申请人报告说，内源性一氧化氮（NO）参与了血管内皮细胞生长因子（VEGF）的作用，以增强小鼠皮肤中的血管通透性（日本药理学学会第92 Kanto会议上的呈现； 1995年）。在这项研究中，为了阐明VEGF的作用机理，我们研究了使用血管内皮细胞和小鼠皮肤的诱导性无合酶（INOS）和碱性氨基酸转运蛋白（CAT）上调的可能性。 CAT参与了精氨酸的细胞内摄取，这是一种NOS的底物，最近据报道，诱导型Cat-2与Inos共同诱导时，当刺激细胞因子刺激血管平滑肌细胞时。 [方法]使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。 HUVEC通过常规方法培养，并在亚互冲突后允许VEGF1-30NG/mL作用0.5-4小时。比较，还研究了肿瘤坏死因子（TNF-α）。药物处理后，提取总RNA，并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检查iNOS和CAT-2的基因表达。对于小鼠皮肤，皮下注射VEGF1-10NG/部位后1-2小时提取注射部位皮肤的总RNA，然后以相同的方式进行Inos的RT-PCR。比较VEGF的400μg/site S.C. 2小时。 [结果]（血管内皮细胞）用于CAT-2，将TNF-α1至30 ng/ml的处理1至24小时，显示mRNA水平显着升高。 VEGF治疗的影响目前正在研究中。 （小鼠皮）通过LPS增加了小鼠皮肤中的iNOS mRNA水平，并增加了VEGF的趋势，但是目前正在研究重现性。