血管内皮細胞増殖因子(VEGF)による血管透過性亢進作用の機序-血管内皮細胞を用いた研究-

血管内皮生长因子(VEGF)诱导血管通透性增强的机制 -利用血管内皮细胞的研究-

基本信息

  • 批准号:
    08670122
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

〔目的〕申請者らは、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)によるマウス皮膚の血管透過性亢進作用に内因性一酸化窒素(NO)が関与することを報告した(第92回日本薬理学会関東部会発表;1995年)。本研究ではVEGFの作用機序の解明を目的として、誘導型NO合成酵素(iNOS)および塩基性アミノ酸トランスポーター(CAT)のup regulationが含まれる可能性について、血管内皮細胞およびマウス皮膚を用いて検討した。CATはNOSの基質であるアルギニンの細胞内への取り込みに関与し、誘導型のCAT-2は、血管平滑筋細胞をサイトカインにより刺激すると、iNOS等と共に共誘導されることが最近報告されている。〔方法〕ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を用いた。HUVECは常法により培養し、サブコンフルエント時に、VEGF1〜30ng/mlを0.5〜4時間作用させた。比較として腫瘍壊死因子(TNF-α)についても調べた。薬物処理後、総RNAを抽出し、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)にてiNOSおよびCAT-2の遺伝子発現について調べた。マウス皮膚については、VEGF1〜10ng/site皮下注射1〜2時間後の注射部位皮膚の総RNAを抽出後、同様にiNOSのRT-PCRを行った。VEGFの比較としてエンドトキシン(LPS)400μg/site s.c.2時間について調べた。〔結果〕(血管内皮細胞)CAT-2については、TNF-α1〜30ng/mlの1〜24時間処置によりmRNAレベルの有意な増加が認められた。VEGF処置の影響については現在研究中である。(マウス皮膚)マウス皮膚のiNOSmRNAレベルは、LPSにより増加が認められ、VEGFでは増加傾向が認められたが、再現性等について研究中である。
[Objective] Report on ら ら, vascular endothelial growth factor (VEGF)による ウス ウス, hyperpermeation of skin vessels に, endogenous nitric acid (NO)が and する する とを とを by the applicant た(92nd meeting of the Japanese Pharmaceutical Society on the Eastern Conference;1995). This study で は VEGF の function machine sequence の interpret を purpose と し て, induced NO synthetase (iNOS) お よ び salt basic ア ミ ノ acid ト ラ ン ス ポ ー タ ー (CAT) の up regulation が containing ま れ る possibility に つ い て, vascular endothelial cells お よ び マ ウ ス を skin with い て beg し 検 た. CAT は NOS の matrix で あ る ア ル ギ ニ ン の intracellular へ の take り 込 み に masato and し, induced の CAT - 2 は, vascular smooth muscle cell を サ イ ト カ イ ン に よ り stimulus す る と sharing, iNOS と に induced さ れ る こ と が recently reported さ れ て い る. [Method] ヒト umbilical vein endothelial cells (HUVEC)を using ヒト た. HUVEC は method often に よ り し, サ ブ コ ン フ ル エ ン ト に, VEGF1 ~ 30 ng/ml を 0.5 ~ 4 role さ せ た. Compare と, て, abscess, 壊, death factor (TNF-α), に,, て, て, べた. 薬 after 処 principle, taking し を 総 RNA, inverse planning write ポ リ メ ラ ー ゼ chain against 応 (rt-pcr) に て iNOS お よ び CAT - 2 の heritage 伝 son 発 now に つ い て adjustable べ た. Youdaoplaceholder0 ウス skin に を て て て て, VEGF1 ~ 10ng/site subcutaneously injection 1 ~ 2 time later, <s:1> 総RNAを is extracted from the <s:1> injection site skin, and the same にiNOS <s:1> RT-PCRを is performed った. VEGF clones compared と, てエ, ドトキシ, ドトキシ (LPS)400μg/site s.c.2 time に,, て て modulation べた. [results] (endothelial cells) CAT - 2 に つ い て は, TNF alpha 1 ~ 30 ng/ml の 1 ~ 24 time 処 buy に よ り mRNA レ ベ ル の intentionally な rights and が recognize め ら れ た. The effect of VEGF placement on に に て て て て is currently being studied in である. (マ ウ ス skin) マ ウ ス skin の iNOSmRNA レ ベ ル は, LPS に よ り raised plus が recognize め ら れ, VEGF で は rights and tendency が recognize め ら れ た が, reproducibility に つ い て study で あ る.

项目成果

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