緑膿菌の薬剤排出ポンプを構成するサブユニット間のトポロジー

组成铜绿假单胞菌药物外排泵的亚基之间的拓扑结构

基本信息

  • 批准号:
    08670319
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.28万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

緑膿菌の多剤耐性に関わっている薬剤排出ポンプはmexオペロン(mexA-mexB-oprM)にコードされており、これら三種類の膜タンパク質が複合体を形成し薬剤を細胞質から外界へ直接排出するというモデルが提唱されている。筆者はこのMexポンプの薬剤排出機構を分子レベルで理解するために、本研究においてこれらのサブユニットに対する抗体を作成し、遺伝子置換法を用いて各サブユニットのみを欠失した変異株、さらにすべての組み合わせにおける二重及び三重変異株を作成した。そしてこれらの各サブユニットの役割を明らかにするために、各変異株に対する各種薬剤の感受性を検討した。その結果、(1)キノロン剤、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、ゲンタミシンに対し、ΔA、ΔB、ΔAB変異株は親株より2-4倍感受性が上がった。一方、ΔM、ΔAM、ΔBM、ΔABM変異株は親株より4-16倍感受性が上がった。(2)β-ラクタム剤に対してはすべての変異株で感受性が上がったが、ΔA、ΔB、ΔAB変異株に比べΔM、ΔAM、ΔBM、ΔABM変異株でわずかに高感受性化していた。またこの感受性の上昇の程度はβ-ラクタム剤の構造に依存していた。以上より、三種類のサブユニットが強固な複合体を形成してMexポンプが機能するというモデルではこれらの結果を説明することは困難であり、むしろMexポンプはMexA/MexB複合体とOprMが独立した機能ユニットとして働くことが示唆された。そしてMexポンプの薬剤排出機構として、細胞質からペリプラズムに薬剤が一旦排出されその後外界へ排出されるという2-ステップメカニズムが示唆された。
The multi-agent tolerance of Pseudomonas aeruginosa is related to the formation of three kinds of membrane protein complexes, namely, the formation of cytosol and the direct excretion of external substances. In this study, we used the gene substitution method to create the double and triple heterozygotes. The sensitivity of each species is discussed. The results are as follows: (1) The sensitivity of heterosis to parental strain is 2-4 fold higher than that of heterosis to parental strain. One side, ΔM, ΔAM, ΔBM, ΔABM are different from the parent plants, and the sensitivity is 4-16 fold. (2)The sensitivity of β-rDNA is higher than that of ΔM, ΔAM, ΔBM and ΔABM. Moreover, the degree of increase in sensitivity is dependent on the structure of the β-racketal agent. The above three types of OprM have strong complex formation and function. The results of OprM have difficulty in forming OprM. The excrete mechanism of MEX and CYTOPLASMIC MEX is described in detail below.

项目成果

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