HTLV-1キャリア中の欠損型プロウイルスの生物学的意味の解明

阐明 HTLV-1 携带者中缺陷原病毒的生物学意义

• 批准号: 08670345
• 负责人: 宮田 博規
• 金额: --
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670345/
• 关键词: HTLV-1キャリア; Long PCR; 欠損型プロウイルス

1.HTLV-1の高感度Long PCR法の開発:Nested Long distance PCR法によりHTLV-1のU5一gag(0.4kb),gag-pol(2.1kb),pol-px(4.1Kb),gag-px(6.2kb)を増幅のターゲットとしてその感度を検討した.pMT-2では,それぞれの領域で目的のサイズの増幅を認め,感度は10-100コピー/μgDNAであり十分に臨床検体に使用できる系を確立した.2.キャリア中の欠損型provirusの検出:キャリア20人を対象とした.U5-gag,gag-pol間では,全検体から設計サイズの増幅産物を得た.pol-px間では,2例のキャリアを除き18例で設計サイズの増幅産物を得た.gag-px間では,17/20例でintactの6.2kb bandは観察できず主としていろいろな大きさのdeletion bandが検出された.キャリア体内に高率に欠損型プロウイルスが存在することが証明できた.3.欠損型プロウイルスのクローニングと塩基配列の決定:gag-px領域に絞り上記PCR産物をクローニングベクターに組み込み塩基配列の決定を行った.11人のキャリアより29クローンの解析の結果,全てのクローンで共通にgag領域の一部,pol全領域,envの一部を欠損していた.また,その結合部位は3-10basesのHomologous sequnceをもって結合しているものが1例を除いて全ての検体で見つかった.加えて1つのクローンたりとも同じ位置での組み換えの例はなくそれぞれユニークなsequenceであった.4.生物学的意味の考察:欠損型プロウイルスは,ATLのCell lineではその存在が証明されていたが,我々の今回の新たな方法の開発解析によりキャリア中にもその存在が明らかにされた.通常他のretrovirusで証明されているようにHTLV-1のDeleted provirusの成因は,逆転写中に起きていることが推察されるがその生物学的意味は依然として不明である.

1. Development of High Sensitivity Long PCR Method for HTLV-1: Nested Long distance PCR method HTLV-1のU5-gag (0.4kb), gag-pol (2.1kb), pol-px (4.1Kb), gag-px (6.2kb) Increase in amplitude and sensitivity. pMT-2 increase in amplitude and sensitivity. Sensitivity: 10 - 100 ° C/μ g DNA: 10 ° C/μ g DNA: 10 ° C DNA: 0 ° C DNA: 10 ° C DNA: 2 ° C DNA: 1 ° C DNA: 2 ° C: DNA: 1 ° C DNA: 2 ° C: DNA: DNA: 1 ° C: DNA: 2 ° C: DNA: DNA: 1 ° C: DNA: DNA: 2 ° C: DNA: DNA: There are 20 people in the audience. Between U5-gag and gag-pol, the full-scale design and support products are available. Between pol-px, In 2 cases, 18 cases were found to have a deletion band of 6.2kb in the design medium. In 17/20 cases, the deletion band of the design medium was found. 3. Determination of group alignment of deficient type of protein: gag-px domain analysis results of PCR products on the list of protein groups. For example, the homological sequnce of the 3 - 10 bases of the binding site is the binding site of the 3 - 10 bases of the binding site. 4. Biological significance of the investigation: Defective type of reverse, ATL cell line of the existence of the proof of the existence of the new method of development analysis in this paper. Usually, the origin of HTLV-1 's deleted provisor is proved by retrovirus, but the biological implication of HTLV-1 's deleted provisor is still unknown.