セルロプラスミン欠損によるヘモジデロ-シスの病態発生機序に関する研究

铜蓝蛋白缺乏所致含铁血黄素沉着症发病机制的研究

• 批准号: 08670745
• 负责人: 武田 伸一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Center of Neurology and Psychiatry
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670745/
• 关键词: 原発性セルロプラスミン欠損症; セルロプラスミン; 銅結合蛋白; 鉄代謝; フェリチン; 活性化酸素; 神経細胞死; 鉄沈着

常染色体劣性の遺伝形式を示し、中年以降にWilson病に類似した不随意運動、肝硬変、糖尿病の症候を呈し、血清のセルロプラスミンの著減する原発性セルロプラスミン欠損症の家系について、我々はセルロプラスミン遺伝子の点突然変異により、スプライシングの異常を介してストップコドンを生じ、C端の欠失したセルロプラスミンが翻訳されるが、銅結合部位を欠くために速やかに肝臓内で崩壊することを明らかにした。本症では、セルロプラスミンのフェロオキシデ-スとしての活性が欠如するために、2価の鉄が3価に酸化されず、組織鉄としてのフェリチンの基底核、肝、膵を中心とした沈着が観察される。一方では、比較的大型の神経細胞の変性と脱落が認められるが、その背景として、鉄沈着による障害の他にセルロプラスミンが活性化酸素の除去機構に関与しているために、活性化酸素による組織障害として、神経細胞の細胞死を招いている可能性がある。そこで、セルロプラスミン欠損による鉄代謝の異常に伴う神経細胞死の機構を明らかにするために、セルロプラスミン遺伝子ノックアウト・マウスを作出し、鉄代謝、活性化酸素と、神経細胞死との関連を詳細に検討することを試みた。最初に、マウス・セルロプラスミン遺伝子のATGを含むexon部分をdeleteし、代わりにNeo耐性遺伝子とnegative selectionのためにtk遺伝子を挿入したターゲティング・ベクターを作製した。次に、同ベクターをelectroporation法を用いて、既にgermline transmissionに関して実績のあるES細胞に導入し、相同組換えを起こしたクローンのみをPCR法及びSouthern blot法を用いてスクリーニングした。現在、約10個の相同組み換え体を得て、マウス胚盤胞への注入によるキメラマウスの作出へのステップに移っている。今後、キメラマウスを得ることができたならば、ワイルドマウスと掛け合わせてヘテロマウスを得、更にヘテロマウス同士の交配によりホモマウスを作出して、表現型の解析に着手したいと考えている。

Traces of autosomal recessive の 伝 form を し, middle age onwards に Wilson disease に similar し た の involuntary movement, hard - liver and diabetes symptoms を し, serum の セ ル ロ プ ラ ス ミ ン の the minus す る original 発 sex セ ル ロ プ ラ ス ミ ン owe loss disease の family に つ い て, I 々 は セ ル ロ プ ラ ス ミ ン heritage 伝 の point son suddenly - different に よ り, ス プ ラ イ シ ン Abnormal グ の を interface し て ス ト ッ プ コ ド ン を じ, lost the c-terminal の owe し た セ ル ロ プ ラ ス ミ ン が turn 訳 さ れ る が, copper combining site を owe く た め に speed や か に で collapse within a routine liver 壊 す る こ と を Ming ら か に し た. This disease で は, セ ル ロ プ ラ ス ミ ン の フ ェ ロ オ キ シ デ - ス と し て の active が owe such as す る た め に, 2 価 の iron objects が 3 価 に acidification さ れ ず objects, organizing iron と し て の フ ェ リ チ ン の basal ganglia, liver, Cui を center と し た shen the が 観 examine さ れ る. One party で は 経 cells, comparing large の god の fall off - sex と が recognize め ら れ る が, そ の background と し て, iron objects shen に よ る handicap of の he に セ ル ロ プ ラ ス ミ ン が activeness の acid element to remove institutional に masato and し て い る た め に, active acid element に よ る organization handicap of と し て の 経 cells die, god を recruit い て い る possibility が あ る. そ こ で, セ ル ロ プ ラ ス ミ ン owe loss に よ る iron objects abnormal metabolism の に 経 cell death with う god の institutions を Ming ら か に す る た め に, セ ル ロ プ ラ ス ミ ン posthumous son 伝 ノ ッ ク ア ウ ト · マ ウ ス を make し objects, iron metabolism, active acid と, god 経 cell death と の masato even を detailed に beg す 検 る こ と を try み た. Initial に, マ ウ ス · セ ル ロ プ ラ ス ミ ン heritage 伝 son の ATG を containing む exon part を delete し, generation わ り に Neo patience heritage 伝 son と negative selection の た め に tk legacy 伝 son を scions into し た タ ー ゲ テ ィ ン グ · ベ ク タ ー を cropping し た. に, with ベ ク タ ー を を electroporation method with い て, both に germline transmission に masato し て be performance の あ る に import し ES cells, the same group in え を up こ し た ク ロ ー ン の み を PCR method and び Southern The blot method を uses を てス, リ, リ, ニ, グ, た, た. Now, about 10 の み in same group え body を て, マ ウ ス blastoderm cell へ の injection に よ る キ メ ラ マ ウ ス の make へ の ス テ ッ プ に move っ て い る. In the future, the キ メ ラ マ ウ ス を have る こ と が で き た な ら ば, ワ イ ル ド マ ウ ス と hang け close わ せ て ヘ テ ロ マ ウ ス を, more に ヘ テ ロ マ ウ ス mating with James の に よ り ホ モ マ ウ ス を make し て の phenotypes, parsing に to し た い と exam え て い る.

项目成果

Pramo D et al.: "A novel target for the antisense therapy---" Biochem Byophys Res Commu. 226. 445-449 (1996)

Pramo D 等人：“反义疗法的新靶点——”Biochem Byophys Res Commu。

武田伸一: "微小重力が発達段階のラット骨格筋---" 宇宙航空環境医学. 33. 67-71 (1996)

Shinichi Takeda：“微重力影响大鼠骨骼肌的发育 ---”航空航天环境医学 33. 67-71 (1996)。