心筋におけるジストロフィン遺伝子の転写調節に関する分子生物学的研究

心肌肌营养不良蛋白基因转录调控的分子生物学研究

• 批准号: 06274234
• 负责人: 武田 伸一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: National Center of Neurology and Psychiatry
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06274234/
• 关键词: DMD遺伝子; ジストロフィン; 心筋; 転写調節; CArG box配列; 筋ジストロフィー; XLCM

心筋障害を主徴とするベッカー型筋ジストロフィー及び心筋障害のみを呈するX-linked dilated cardiomyopathy(XLCM)では、DMD(ジストロフィン)遺伝子の5′端に異常が検出されあるいは想定されていることから、同遺伝子の心筋における転写調節機構について検討を行った。1.DMD遺伝子の心筋における転写開始部位の検索ヒト心筋から調整したmRNAを材料として、RNase protection法及び5′-racing法を用いて検索を行い、ジストロフィンの心筋における転写開始部位が骨格筋と同一であって、共通した筋型プロモーターによって転写が行われることを明らかにした。2.DMD遺伝子筋型プロモーターの心筋における発現調節機構DMD遺伝子の筋型プロモーターにCAT遺伝子を組み替えたクローンを出発点として、一連の5′-欠失ミュータントを作製した。これらのミュータントをlipofection法を用いて新生仔ラット初代心筋細胞に導入し、細胞を回収してCAT assayを行った。初代心筋細胞において、最も高い転写活性を与えるのは上流-102bp以下を含むミュータントであり、同部にはCArG box配列が存在した。一方、転写開始部位より下流にも心筋の転写を軽度に活性化する部位が認められた。更に、CArG box配列及びその周辺に塩基変異を導入して細胞導入実験によりその効果を検討した所、CArG box配列及びその3′端に塩基変異を導入した場合に活性の低下が観察された。そこで、初代心筋培養細胞から核抽出液を作製して、CArG box配列及びその周辺をプローブとするゲル・シフトアッセイを行ない、同部に結合する蛋白質によるバンドを二つ見出した。同じバンドは、初代心筋培養細胞のみでなくC2骨格筋細胞株や10T1/2線維芽細胞株からも検出されたことから、組織特異的な因子ではないが、その結合が組織特異的に調節されている可能性が考えられた。

The damage to the heart is caused by the X-linked dilated cardiomyopathy (XLCM), the DMD (the heart), the number of the patients, and the number of the patients. The beginning of 1.DMD is the same as that of the bone lattice at the beginning of the writing process, which is the same as that of the bone lattice at the beginning of the writing of the mRNA material, the RNase protection method and the 5'-racing method. The 2.DMD rib type has been installed, and the heart has been found in the machine DMD. The rib type has been installed in the machine, and the CAT has been installed in place of the machine. It can be used as a substitute for the equipment. Please tell me that the lipofection method uses the newborn baby to enter the cell and the cell to return to the CAT assay line. In the first generation, the most active, the most active, and the top-end of the mind, the first generation, the first generation, the highest, the highest, the highest On the one hand, the opening part of the writing system is very sensitive to the degree of activity in the beginning of the writing. Change, CArG box configuration and the number of units in the cell, the number of cells, the number of cells, the number In the same part, the extract of the nucleus was extracted from the cells of the first generation of heart muscle, the extract of the nucleus was used for the preparation of the liquid, the arrangement of CArG box and the combination of protein and protein in the same part. The same as the primary heart muscle culture cell line, the primary heart muscle culture cell line, the 10T1/2 cell line, the cell line, the cell line,

项目成果

武田伸一(分担執筆): "臨床遺伝医学VI" 診断と治療社(印刷中), (1995)

Shinichi Takeda（撰稿人）：《临床遗传医学VI》诊断与治疗出版社（正在出版），（1995）

武田伸一: "DMD遺伝子/ジストロフィンの異常と拡張型心筋症" 内科. 75. 441-446 (1995)

Shinichi Takeda：“DMD 基因/肌营养不良蛋白异常和扩张型心肌病”《内科》75. 441-446 (1995)。

Sekijima,Y.et al.: "A case of cytoplasmic myopathy with hypertrophic…" Jpn J Int Med. (in press). (1995)

Sekijima, Y. 等人：“伴有肥厚性细胞质肌病的病例……”Jpn J Int Med（出版中）。

宮越友子、他: "筋の発生・分化の分子機構" 小児科臨床. 47. 2439-2435 (1994)

Tomoko Miyakoshi 等人：“肌肉发育和分化的分子机制”儿科学 47. 2439-2435 (1994)

Yoshida,K.et al.: "A mutant in the ceruloplasmin gene is associated with…" Nature Genet. (in press). (1995)

Yoshida, K. 等人：“铜蓝蛋白基因的突变体与……有关”《Nature Genet》（出版中）。