インスリンによる糖輸送に関与するインスリンシグナル伝達経路に関する研究

胰岛素诱导的葡萄糖转运中胰岛素信号通路的研究

基本信息

批准号：
08671149
负责人：
吉政康直
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

项目摘要

1.Constitutive active MAPキナーゼ・キナーゼ(MAPKK)を用いたMAPキナーゼが関与するインスリン作用の検討MAPキナーゼ経路において、MAPKKはそのリン酸化部位(S218,S222)にグルタミン酸を導入することでconstitutive activeになることが示されている。Xenopus MARKK cDNAを用いて、N端アミノ酸を欠失させ(32-51)、セリン(218,222)をグルタミン酸に置換したもの(ΔSE^2)を作製した。ΔSE^2を組み込んだ高力価のvirus solutionを3T3L1前脂肪細胞にinfectすることで、脂肪細胞に高率に分化する細胞株を樹立した。これらの細胞株は内因性MAPKKとともにΔSE^2蛋白を発現しており、糖輸送はインスリン非存在下で親株である3T3L1脂肪細胞のインスリン刺激時の糖輸送と同等であり、MAPキナーゼは糖輸送担体(GLUT1,GLUT4)のトランスロケーションに関与していることが示唆された。また、これらの細胞株はMAPキナーゼのグリコーゲン合成、脂肪細胞特異的遺伝子発現への関与を検討するのに有用である。2.インスリンシグナル伝達におけるP13キナーゼ経路とMAPキナーゼ経路の相互作用の検討PI3キナーゼ特異的阻害剤であるwortmanninを用いて、3T3L1脂肪細胞においてインスリンによるMAPキナーゼ経路の活性化にPI3キナーゼが関与していること、PI3キナーゼはMAPキナーゼ経路のraf-1キナーゼの活性化に必要であることを示し、両経路に相互作用が存在することを示した。また、この相互作用にリガンド特異性、細胞特異性が認められることも示した。

1。使用组成型活性MAP激酶（MAPKK）在MAP激酶途径中检查涉及MAP激酶的胰岛素作用，已经证明MAPKK通过将谷氨酸引入其磷酸化位点（S218，S2222），通过将谷氨酸引入其组成性活性。爪蟾Markk cDNA用于删除N末端氨基酸（32-51），并创建丝氨酸（218,222），被谷氨酸（ΔSe^2）代替。通过感染将ΔSe^2掺入3T3L1前脂肪细胞中的高细胞病毒溶液，建立了区分脂肪细胞的细胞系。这些细胞系与内源性MAPKK一起表达ΔSe^2蛋白，在没有胰岛素的情况下，糖的传输等于糖的传输期间糖传输过程中的糖转运蛋白在胰岛素3T3L1脂肪细胞中，这表明MAP激酶参与糖转运载体的易位（Glut1，Glut1，Glut4）。这些细胞系也可用于研究MAP激酶参与糖原合成和脂肪细胞特异性基因表达的参与。 2。检查p13激酶途径与使用wortmannin（一种pi3激酶特异性抑制剂）在胰岛素信号传导中的相互作用的检查，我们表明PI3激酶参与了3T3L1脂肪酶的胰岛素在pi3 kinsase中的激活，pi3激酶参与MAP激酶途径的激活。激酶途径，表明这两个途径都存在相互作用。还显示出在这种相互作用中观察到配体特异性和细胞特异性。