PCR法を用いた卵管特異糖蛋白質のゲノムクローニングとその発現機構の解明

PCR法克隆输卵管特异性糖蛋白基因组并阐明其表达机制

基本信息

批准号：
08671862
负责人：
荒木慶彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671862/
关键词：
卵管糖タンパク質ゲノムクローニング PCR マウス ERE

项目摘要

近年、ヒトを含めた種々の哺乳動物で卵管に特異的に発現し、配偶子を修飾する活性を持つ糖蛋白質が報告されているが、その生殖生理学的な活性は未だ多くの点が不明である。我々は1980年代より、生殖生物学では優れた実験動物であるゴールデンハムスターの卵管特異糖蛋白質を発見し、この物質の生化学的性状・生殖生物学的性状を明らかにしてきたが、最近この分子及びマウスにおけるhomologueのcDNAのクローニングに成功した。本研究では、我々により明らかにされたマウス卵管特異糖蛋白質(MOGP)cDNAの塩基配列を利用し、卵管特異糖蛋白質ノックアウトマウスの作製、及び同分子の生体内に於ける発現機構を理解するために不可欠な、同分子をコードするゲノムDNAの構造解析を主としてPCR法を用いて試み、現在まで以下の結果を得た。1)MOGP遺伝子は全長約13.4kbp、その転写開始地点は開始コドンより、-18、-14塩基上流にある2箇所のアデニンであった。2)同遺伝子は11個のエクソンと、10個のイントロンより構成されており、そのエクソン/イントロン接合部位は全てGT/AG ruleに合致していた。3)各エクソンの長さは30(エクソン2)〜1355(エクソン11)bpであり、イントロンサイズは0.1〜3.5kbであった。3)MOGP種特異的な部位と考えられているアミノ酸C末端側はエクソン11に一括して存在していた。4)MOGP遺伝子5′上流域には典型的なTATA boxが存在していなかったが、5′上流域にhalf palindromic estrogen responsive element (ERE)が8箇所、またimperfect EREが1箇所存在していた。以上の結果は現在我々が作製を試みている卵管特異的糖蛋白質ノックアウトマウスを用いた同物質の生殖生理学的活性の解明のための重要な基礎データであり国際的にも注目されている研究結果である。

最近，已经在包括人类在内的多种哺乳动物中报道了在输卵管中特异性表达并具有修改配子的活性的糖蛋白，但其生殖生理活性的许多点仍然未知。自1980年代以来，我们发现了金仓鼠的输卵管特异性糖蛋白，这是一种实验性动物，在生殖生物学方面一直很出色，并揭示了这种物质的生化和生殖生物学特性，但最近我们成功地克隆了这种分子和同源物cDNA。 In this study, we used the base sequence of mouse fallopian tube-specific glycoprotein (MOGP) cDNA revealed by us to try using PCR mainly to analyze the structural analysis of the genomic DNA encoding the same molecule, which is essential for the production of fallopian tube-specific glycoprotein knockout mice and for understanding the in vivo expression mechanism of the same molecule, and to date, the following results have已获得。 1）MOGP基因的长度约为13.4 kbp，其转录起点是刚开始密码子-18和-14碱基上游的两个腺丝。 2）该基因由11个外显子和10个内含子组成，所有外显子/内含子连接点均与GT/Ag规则相匹配。 3）每个外显子的长度为30（外显子2）至1355（外显子11）bp，内含子大小为0.1至3.5 kb。 3）氨基酸的C末端一侧被认为是MOGP物种特有的位点，在外显子11。4）上游区域中都没有典型的Tata盒，但上游区域中没有典型的TATA盒子，但有八个半圆锥形雌激素响应式元件（ERES），一个不完美的eRe在5'上游区域中。以上结果是使用我们目前正在尝试生产的输卵管特异性糖蛋白基因敲除小鼠，阐明同一物质的生殖生理活性的重要基本数据，并引起了国际关注。