In situハイブリダイゼーション法を用いた卵管特異糖蛋白質の発現機構の解明

原位杂交方法阐明输卵管特异性糖蛋白的表达机制

• 批准号: 07671764
• 负责人: 荒木 慶彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671764/
• 关键词: 卵管; 糖蛋白質; In situ hybridization; ハムスター; 性腺ステロイド

近年、ヒトを含めた種々の哺乳動物で卵管に特異的に発現し、配偶子を修飾する活性を持つ糖蛋白質の存在が報告されている。この糖蛋白質はその生殖生理学的な真の活性は、間接的には種々の可能性が提唱されているものの、未だ多くの点が不明である。我々は1980年代より、生殖生物学では優れた実験動物であるゴールデンハムスターで卵管特異糖蛋白質を発見し、この物質の生化学・分子生物学的性状・生殖生物学的性状を明らかにしてきた。本研究では同物質のcDNAを用いて、In situ hybridization法を用いた、ハムスター、卵管特異糖蛋白質mRNAの発現の解析を試み、この分子のin vivoに於ける発現動態の解明を試み、現在まで以下の結果を得た。In situ hybridization法では1.卵管膨大部・峡部共にmessageの発現を上皮にに認めたが、膨大部が上皮細胞核周囲部にmessageを認めるのに対し峡部では核下基底膜側にのみ発現を認めた。2.性周期に於いては峡部では発現に有意な差を認めなかったが膨大部ではdiestrous day1に特徴的な発現の減少を認めた。3.messageは生後約14日目より認められ、加齢により血中エストロゲン濃度が低下するに従い有意な発現減少を認めた。4.messageは妊娠中にも強く認められ、また分娩後、血中エストロゲン濃度の急激な低下に伴い減少した。5.卵巣摘出、或いはGnRHアナログの投与により血中エストロゲン・プロゲステロンを低下させた動物では有意な発現の減少を認めた.またこの動物に対し、エストロゲンの補充によりmessageの発現量の回復を確認した。6.霊長類で認められるプロゲステロンによる強力な発現の抑制はハムスターでは認められなかった。以上の結果より同物質の発現は齧歯類に於いてもエストロゲン依存性にコントロールされている事を強く示唆すると思われる。この研究結果は現在我々が作製を試みている卵管特異的糖蛋白質ノックアウトマウスを用いた同物質の生殖生理学的活性の解明のための重要な基礎データであり国際的にも注目されている研究結果である。

In recent years, ヒ ト を containing め た kind 々 の mammals で egg tube に specific に 発 し, gamete を modified す る つ sugar protein の existence active を が report さ れ て い る. こ の sugar protein は そ の reproductive physiology な is の active は, indirect に は kind 々 が の possibility to sing さ れ て い る も の の, not だ く の point が unknown で あ る. I 々 は 1980 s よ り, reproductive biology で は optimal れ た be 験 animal で あ る ゴ ー ル デ ン ハ ム ス タ ー で egg tube specific sugar protein を 発 し, こ の material の biochemistry, molecular biology, reproductive biology traits を Ming ら か に し て き た. This study で は with material の cDNA を with い て, In situ hybridization method を with い た, ハ ム ス タ ー, egg tube specific sugar protein mRNA の 発 is の parsing を み, こ の の molecules In vivo に In け る 発 dynamic の now interpret を み, now ま で の results under を た. The In situ hybridization method で は 1 egg, tube expansion of spondylolysis, total に message の 発 now を epithelial に に recognize め た が, stigmas weeks 囲 が epithelial cells に message を recognize め る の に し seaborne spondylolysis で は nuclear basement membrane under lateral に の み 発 を now recognize め た. 2. Cycle に in い て は spondylolysis で は 発 に now intends to poor な を recognize め な か っ た が) department で は diestrous day1 に of 徴 な 発 の reduce を now recognize め た. 3. Message は gave birth to about 14 days after item よ り recognize め ら れ, 齢 に よ り blood エ ス ト ロ ゲ ン low concentration が す る に 従 い intentionally な 発 now reduce を recognize め た. 4. Message は pregnancy に も strong く recognize め ら れ, ま た after childbirth, blood エ ス ト ロ ゲ ン low concentration の nasty shock な に with い reduce し た. 5. Egg 巣 picking out, or い は GnRH ア ナ ロ グ の cast with に よ り blood エ ス ト ロ ゲ ン · プ ロ ゲ ス テ ロ ン を low さ せ た animal で は intentionally な 発 の reduce を now recognize め た. ま た こ の animal に し seaborne, エ ス ト ロ ゲ ン の supplement に よ り message の 発 amount is の RSVP with を し た. 6. 霊 long class で recognize め ら れ る プ ロ ゲ ス テ ロ ン に よ る powerful な 発 is の inhibit は ハ ム ス タ ー で は recognize め ら れ な か っ た. の above results よ り with material の 発 now gritting は 歯 in に い て も エ ス ト ロ ゲ ン dependency に コ ン ト ロ ー ル さ れ て い る matter を く and shown strong sucking す る と think わ れ る. こ の results は now I 々 が cropping を try み て い る egg tube specific sugar protein ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を with い た with material の reproductive physiology active の interpret の た め の important foundation デ な ー タ で あ り international に も attention さ れ て い る results で あ る.

项目成果

Tulsiani D.R.P.et.al.: "Purification and characterization of two forms of β-D-galactosidase from rat epididymal luminal fluid: Evidence for their role in the modification of sperm plasma membrane glycoprotein(s)." Biochemical Journal. 305. 41-50 (1995)

Tulsiani D.R.P.等人：“从大鼠附睾腔液中纯化和表征两种形式的 β-D-半乳糖苷酶：它们在精子质膜糖蛋白修饰中的作用的证据。生化杂志”305。 50 (1995)

Takahashi K.et.al.: "Isolation and partial characterization of the gene for mouse oviduct-specific glycoprotein." Biology of Reproduction. 54(in press). (1996)

Takahashi K.et.al.：“小鼠输卵管特异性糖蛋白基因的分离和部分表征。”

Komiya H.et.al.: "Identification of hamster oviduct-specific glycoprotein messenger ribonucleic acid by in situ hybridization" Biology of Reproduction. 52(suppl.1). 119- (1995)

Komiya H.et.al.：“通过原位杂交鉴定仓鼠输卵管特异性糖蛋白信使核糖核酸”生殖生物学。

Tulsiani D.R.P.et.al.: "The temporal surge of glycosyltransferase activities in the genietl tract of hamster duraing the estrous cycle." Biology of Reproduction. 54. 1032-1037 (1996)

Tulsiani D.R.P.等人：“在发情周期期间，仓鼠生殖道中糖基转移酶活性的暂时激增。”

Suzuki K.et.al.: "Molecular characterization of hamster oviduct-specific glycoprotein." Biology of Reproduction. 53. 345-354 (1995)

Suzuki K.et.al.：“仓鼠输卵管特异性糖蛋白的分子特征。”