網膜芽細胞腫におけるTGF-βスーパーファミリーの生理的機能の解析

TGF-β超家族在视网膜母细胞瘤中的生理功能分析

• 批准号: 08672049
• 负责人: 堀江 公仁子
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672049/
• 关键词: 網膜芽細胞腫; Y79細胞; WERI細胞; TGF-β; TGF-βI型受容体; TGF-βII型受容体; 受容体発現; 遺伝子導入

本研究により,網膜芽細胞腫におけるTGF-β受容体の発現と生理的意義について,本年度中に以下の内容を明らかにし,第100回日本眼科学会総会および第12回国際眼研究会議において学会発表を行った。今後,本研究の結果を論文発表する予定である。1)網膜芽細胞種細胞株であるY79細胞およびWERI細胞において,TGF-βI型受容体mRNAの発現はノーザン解析で確認されたが,TGF-βII型受容体mRNAの発現はほとんど認められなかった。現在,これら細胞において,TGF-β受容体ゲノムDNAの解析を群馬大学外科学教室と共同で行っている。2)[125I]標識TGF-βを用いた分子間架橋結合法・免疫沈降法では,網膜芽細胞腫細胞ではTGF-βII型受容体蛋白の発現は認められなかった。3)網膜芽細胞腫細胞において,TGF-β1による細胞増殖抑制の効果は,MTTアッセイ法では認められなかった。4)網膜芽細胞腫細胞において,TGF-βのシグナル伝達の下流分子であるsmad分子が細胞質から細胞核に移行しうるか,特異的抗体を用いた免疫組織化学的方法を本年度中に確立することができた。さらに細胞に各種の刺激やTGF-β受容体遺伝子を発現させることにより,smad分子の動きが明らかになるか検討をつづけたい。5)網膜芽細胞腫細胞株へのTGF-β受容体遺伝子導入により,TGF-βによるPAI-1遺伝子のプロモーター領域を活性化する作用がみられるか,ルシフェラーゼ活性の測定を行った。TGF-βI型受容体・II型受容体を2つとも遺伝子導入することにより,2〜3倍程度の活性上昇が認められ,この細胞で,受容体以降のシグナル伝達が保存されている可能性が示唆された。現在さらに効率のよい方法で遺伝子導入する実験系を確立しつつある。本研究により,網膜芽細胞腫においてはTGF-βリガンドの感受性が認められないのは,II型受容体の発現の欠如ないし低発現が原因として最も考えられ,受容体遺伝子導入により,TGF-βのシグナル伝達機構が正常に作動する可能性が強く示唆された。本研究は,臨床的に網膜芽細胞腫の腫瘍増殖抑制機構を解明しようとするものであり,腫瘍の遺伝子治療の可能性にもつながり,極めて重要な意義を有している。

In this study, the development and physiological significance of TGF-β receptor in retinal germ cell swelling were discussed. In this year, the following contents were presented at the 100th Japan Academy of Ophthalmology Conference and the 12th International Eye Research Conference. In the future, the results of this study will be presented in the paper. 1)The expression of TGF-β type I receptor mRNA in omental bud cell line Y79 and WERI cell line was confirmed by analysis of TGF-β type II receptor mRNA. At present, the expression of TGF-β receptor in cells is analyzed by DNA analysis in the Department of Surgery, Gunma University. 2)[125I] identifies TGF-β protein expression by molecular bridge binding and immunoprecipitation. 3)The effect of TGF-β1 on proliferation inhibition of omental blastoma cells is that MTT assay can be used to detect the proliferation of omental blastoma cells. 4)In omental blastoma cells,TGF-β protein expression and down-regulation of smad molecules from cytoplasm to nucleus were identified by immunohistochemical methods in the middle of this year. In addition, the expression of TGF-β receptor genes in cells is also investigated. 5)TGF-β receptor gene transfer into omental blastoma cell line,TGF-β receptor PAI-1 gene activation in the field of cell proliferation, and measurement of TGF-β receptor activity. TGF-β type I receptor and type II receptor were introduced into the cell, and the activity increased by 2 ~ 3 times. The possibility of receptor preservation was indicated. Now the efficiency of the method is introduced into the system. In this study, the sensitivity of TGF-β to receptor gene expression in omental germ cell tumors was identified, and the reasons for the low occurrence of receptor type II were investigated. The possibility of normal operation of TGF-β receptor expression mechanism was strongly suggested by the introduction of receptor gene. This study is of great significance to the understanding of the mechanism inhibiting the proliferation of retinal blastoma and the possibility of treatment of retinal blastoma.

项目成果

宮園浩平編(堀江公仁子他): "細胞増殖因子療法 12章 眼疾患と細胞増殖因子(堀江執筆分)" メデイカルレビュー社, 333 (1996)

宫园晃平（堀江公子等人）编辑：“细胞生长因子治疗第12章眼部疾病和细胞生长因子（堀江撰写）”医学评论公司，333（1996）