阻害剤をプローブとするアロマターゼの解媒機能解析

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本研究は、我々が開発した阻害剤である天然基質androstenedione(AD)の3-デオキシ体と6-アルキル体や5-en-7-oneステロイド等をプローブとして、アロマターゼ触媒機能の解析を目的とした。まず、3-デオキシADと5-en-7-one体の19-水酸化体と19-オキソ体を、dehydroepiandrosteroneを出発原料として合成に成功した。次いで、これらの19-水酸化体を常法に従い、対応する脱メチル化体(△^<10(1)>体)へ誘導した。また、6-アルキルADと6-オキソADの2,2-ジメチル体の19位酸素化体を合成するには至らなかった。これら合成された19-酸素化体と△^<10(1)>体のGC-MSを検討した結果、水酸基をTMS又はIPDMS等のシリルエーテルに、カルボニル基をメトキシムに誘導することにより、高感度に定量可能であった。次に、ヒト胎盤ミクロゾームを酵素源として、NADPH存在下阻害剤をそれぞれインキュベートした。6-アルキルADについては、6-アルキルエストラジオールをbis-TMS誘導体として、また、他の基質では19-酸素化体や△^<10(1)>体の生成をそれぞれGC-MSにて分析した。その結果、6-アルキルADの芳香核化のK_m値と拮抗阻害剤としてのK_i値との間には有意な相関がないことや、6α-アルキル体が6β-異性体に比較し、より効率的に芳香核化されることなどが明らかとなった。他方、3-デオキシADは、ADに比べれば効率は低いものの、19位酸素化反応を受けるが、脱メチル化体の△^<10(1)>体へには変換しないことも判明した。しかし、本研究では、5-en-7-one体の19位酸素化反応を検出することができなかった。以上、アロマターゼの触媒機能について新しい知見が得られるとともに、阻害剤としての特性と基質としての機能との関係を、本研究で初めて明らかにすることができた。