DNA-糖鎖コンジュゲートの合成と細胞標的性をもつ新規アンチセンス分子への応用

DNA-糖链缀合物的合成及其在具有细胞靶向特性的新型反义分子中的应用

• 批准号: 10145223
• 负责人: 松浦 和則
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10145223/
• 关键词: DNA; 糖鎖; ジアゾカップリング; ヌクレアーゼ耐性; レクチン認識能

近年、さまざまな先天性・後天性疾患の治療や症状の緩和のために、遺伝子レベルで治療を行うアンチセンス療法などの遺伝子治療が注目を集めている。一方、T偶数系のファージは、グルコースを側鎖にもつシチジンを含むDNAを持っており、これは宿主に感染したときに制限酵素などにより切断されるのを抑制していると考えられている。本研究では、これを模倣し、DNAに細胞標的性を持たせるために、DNA-糖鎖コンジュゲートを簡便な方法により合成した。末端に芳香族アミノ基を持つラクトース誘導体を合成し、サケ精子DNAへのジアゾカップリングにより、DNA-ラクトースコンジュゲートを得た。DNAへのラクトースの導入率は、グアニン含量にほぼ比例して増加しグアニン選択的に糖鎖が導入されていることがわかった。得られたDNA-ラクトースコンジュゲートは、B型二重らせん構造を保持していることがCDスペクトルによりわかった。また、二重鎖の安定性は大幅に向上した、DNase IおよびExonuclease IIIに対してある程度の耐性を示すことがわかった。次にコンジュゲートのレクチン認識能力をゲルシフトアッセイおよび蛍光スペクトルにより検討した。β-Gal末端を認識するRCA_<120>は2.4×10^5M^<-1>の結合定数で結合したが、非特異的なレクチンであるCon Aにはほとんど結合しなかった。また、同様の方法により、プラスミドDNAに対してもラクトース誘導体を導入することができた(導入率約3%)。得られたコンジュゲートは、レクチン認識能、ある程度の制限酵素耐性をもち、さらに未修飾プラスミドと同様にin vitro転写を行うことが出来る事がわかった。

In recent years, the treatment of congenital and acquired diseases, the alleviation of symptoms, and the treatment of genetic diseases have attracted much attention. A party, T even system of white, white In this study, a simple method for DNA synthesis was developed. The terminal aromatic group was synthesized and the sperm DNA was extracted. The introduction rate of DNA protein increased with the increase of protein content. DNA-linked DNA is the most common type of DNA in the world. The stability of DNase I and Exonuclease III is significantly higher than that of DNase I and Exonuclease III. The next step is to identify the person who has the ability to identify the person who has the ability to identify the person.β-Gal terminal recognition RCA_<120>2.4×10^5M^<-1>binding constant binding, non-specific binding In addition, using the same method, it is possible to introduce the mouse inducer into the plasmid DNA (the introduction rate is about 3%). In order to improve the quality of the products, we should pay attention to the quality of the products.

项目成果

Kazunori Matsuura: "Synthesis of DNA-carbohydrate conjugate via dlazocoupling : A new class of modified DNA with enhanced stability and lectin-recognition ability" Chemistry Letters. No.3. (1999)

Kazunori Matsuura：“通过 dlazocoupling 合成 DNA-碳水化合物缀合物：一类具有增强稳定性和凝集素识别能力的新型修饰 DNA”《化学快报》。