生体内トラフィッキングを制御する分子集積ウイルスレプリカの創製

创建控制体内贩运的分子组装病毒复制品

• 批准号: 22H02199
• 负责人: 松浦 和則
• 金额: $ 11.32万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02199/
• 关键词: ウイルスレプリカ; 生体内トラフィッキング; エンベロープ; ヘマグルチニン; 血液脳関門

脳などの特定臓器・特定細胞・特定オルガネラへトラフィッキングする人工材料を構築できれば、革新的なドラッグデリバリー材料として有用であるが、これまでそのようなウイルス模倣材料を創製した例は無い。本研究では、研究代表者が培ってきた「化学ウイルス学」に基づいた機能性分子修飾人工ウイルスキャプシドの構築技術を駆使して、脳内・標的細胞・細胞内標的部位へトラフィッキング制御する分子集積ウイルスレプリカを化学の力で創製することを目的としている。今年度は、エンベロープ型人工ウイルスキャプシド上に、無細胞発現系を用いて、ヘマグルチニン(HA)を搭載した「インフルエンザウイルスレプリカ」を創製した。HA発現は、SDS-PAGEおよび抗HA抗体を用いたウエスタンブロッティングにより確認し、HAがエンベロープ上に搭載されていることを、抗HA抗体と金ナノ粒子ラベル二次抗体を用いたTEM観察により明らかにした。さらに、ヘマグルチニン搭載ウイルスレプリカの分子認識能を、糖脂質GM3を電極上に固定化した水晶発振子マイクロバランス（QCM）を用いて定量解析し、100 nMオーダーでGM3に選択的に結合することを明らかとした。また、効率的な新規ウィルスレプリカ作製手法の開発ならびにウィルスレプリカに対する組織、細胞への標的指標性の付与、などもおこなった。具体的には、ウィルスレプリカ作製に際して、新たに開発した脂質膜透過法を用い、脂質膜を効率的にコア微粒子に被覆する手法を見出した。標的指標性の付与を目的として磁性ナノ粒子を脂質膜と複合化する手法を開発した。さらに、複数の膜タンパク質を単一のウィルスレプリカに搭載するための手法の開発を目的として、固相合成法により脂質膜被覆微粒子に対して複数の膜タンパク質を簡便に搭載することが可能であることを予備的に明らかにした。

脳 な ど の specific viscera, certain cells, specific オ ル ガ ネ ラ へ ト ラ フ ィ ッ キ ン グ す る を constructing artificial material で き れ ば, innovative な ド ラ ッ グ デ リ バ リ ー material と し て useful で あ る が, こ れ ま で そ の よ う な ウ イ ル ス imitation material を created し は no い た example. This study で は representatives, research が culture っ て き た "chemical ウ イ ル ス learning" に base づ い た modification of functional artificial ウ イ ル ス キ ャ プ シ ド の building technology を 駆 make し て, 脳 within cells, mark, mark parts へ ト ラ フ ィ ッ キ ン グ suppression す る molecular set product ウ イ ル ス レ プ リ カ を chemical の force で す る こ と を purpose と し て い る . Our は, エ ン ベ ロ ー プ type artificial ウ イ ル ス キ ャ プ シ ド に, cell free 発 practice while department を い て, ヘ マ グ ル チ ニ ン (HA) を carry し た "イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス レ プ リ カ" を created し た. HA 発 は, sds-page お よ び HA antibody を resistance with い た ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り confirm し, HA が エ ン ベ ロ ー プ に carry on さ れ て い る こ と を, HA antibody と gold ナ ノ particle ラ ベ ル を secondary antibody with い た TEM 観 examine に よ り Ming ら か に し た. さ ら に, ヘ マ グ ル チ ニ ン carry ウ イ ル ス レ プ リ カ の molecular recognition can を, sugar, lipid GM3 を electrode に immobilized し た 発 crystal oscillator マ イ ク ロ バ ラ ン ス (QCM design) を い て quantitative analytic し, 100 nM オ ー ダ ー で GM3 に sentaku に combined す る こ と を Ming ら か と し た. ま た, sharper rate な new rules ウ ィ ル ス レ プ リ カ system technique の for 発 な ら び に ウ ィ ル ス レ プ リ カ に す seaborne る tissue, cell へ の mark indexes の dub, な ど も お こ な っ た. Specific に は, ウ ィ ル ス レ プ リ カ cropping に interstate し て, new た に open 発 し た lipid membrane through the method of を い, lipid membrane を sharper rate に コ ア に coating particles す る way to を see a し た. Mark indexes の give を purpose と し て magnetic ナ ノ composite particle を lipid membrane と す る gimmick を open 発 し た. さ ら に, plural の membrane タ ン パ ク qualitative を 単 a の ウ ィ ル ス レ プ リ カ に carry す る た め の gimmick の open 発 を purpose と し て in, solid diagnosis に よ り lipid membrane coating particles に し seaborne て plural の membrane タ ン パ ク qualitative easy を に carry す る こ と が may で あ る こ と を reserve に Ming ら か に し た.

项目成果

コネキシン搭載ウイルスレプリカを用いたリポソーム・細胞への分子輸送

使用连接蛋白负载的病毒复制品将分子转运至脂质体和细胞

• 发表时间: 2022
• 作者: 古川 寛人，石川 唯也，稲葉 央，佐々木 善浩，秋吉 一成，松浦 和則

化学でウイルスレプリカを合成する

使用化学合成病毒复制品

• 发表时间: 2022
• 作者: Takarada Yuki;Ogasawara Shin;Tamiaki Hitoshi;松浦和則
• 通讯作者: 松浦和則

胞透過法による生体膜ハイブリッド微粒子の構築と特性評価

利用细胞渗透法构建生物膜杂化微粒并表征

• 发表时间: 2022
• 作者: 右京慶吾;佐々木善浩;澤田晋一;秋吉一成
• 通讯作者: 秋吉一成

CSJカレントレビュー第45号「生体分子環境の化学－分子夾雑と1分子で解き明かす生体の挙動」

CSJ Current Review第45期“生物分子环境的化学-用单个分子解释分子污染和生物行为”

• 发表时间: 2023
• 作者: 日本化学会編 （Part2;4章pp. 54-59を松浦が執筆担当）
• 通讯作者: 4章pp. 54-59を松浦が執筆担当）

インフルエンザウイルス捕捉材料としてのシアリルラクトース修飾人工ウイルスキャプシドの創製

唾液乳糖修饰的人工病毒衣壳作为流感病毒捕获材料的创建

• 发表时间: 2022
• 作者: Takarada Yuki;Hara Nobuyuki;Ogasawara Shin;Tamiaki Hitoshi;矢野智美，稲葉央，長尾匡憲，三浦佳子，松浦和則
• 通讯作者: 矢野智美，稲葉央，長尾匡憲，三浦佳子，松浦和則