哺乳類動物におけるWntシグナルの機能解析

哺乳动物 Wnt 信号的功能分析

• 批准号: 10152260
• 负责人: 八尾 良司
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152260/
• 关键词: Wntシグナル; frizzled; APC; β-カテニン

APC遺伝子の変異による発癌機構おけるwntシグナルの役割を解析する目的で、β-カテニンの動態およびTCF/lef依存性の転写活性を、大腸腺腫および大腸癌由来細胞株で検討した。その結果、すべての大腸癌由来細胞株においてβ-カテニンが細胞質および核内に蓄積しているのに対し、大腸腺腫由来細胞株においては、β-カテニンは細胞接着面に存在し正常上皮細胞との顕著な違いは観察されなかった。一方ルシフェラーゼアッセイのより測定されたTCF/lef依存性転写活性では、大腸癌由来細胞株においては正常上皮細胞の20-50倍程度の高い値を示したが、大腸腺腫由来細胞株においては、3倍程度の値を示した。これらの結果は、TCF/lef依存性転写活性が、正常上皮細胞から大腸腺腫さらに大腸癌への移行と相関していることを示している。さらに正常APCタンパク質を保持している293細胞にWnt3a遺伝子またはβ-カテニンを導入するとTCF/lef依存性転写活性が上昇することを見いだした。現在これらの系を用いて、WntシグナルのAPC遺伝子の変異による腫瘍発生機構との関係についてさらに詳細な解析を進めている。一方、wntタンパク質受容体であるfrizzledタンパク質の機能を解析する目的で、酵母のtwo hybrid法を用いてfrizzledタンパク質と相互作用する分子の同定を試みた。その結果、frizzled5およびfrizzled8タンパク質と相互作用する新規タンパク質fzipを同定した。fzipタンパク質はPDZ domainとcoiled-coil motifを有する455アミノ酸をコードするタンパク質であり、fzipタンパク質の機能解析によりWntシグナルの同定およびその腫瘍発生過程への寄与の検討を試みている。

APC gene differentiation, tumor development mechanism, tumor cell activity, β-cell dynamics, and TCF/lef dependent transcription activity were studied. The results showed that the β-cells in the colorectal carcinoma-derived cell lines accumulated in cytoplasm and nucleus, and the β-cells in the colorectal carcinoma-derived cell lines were present in the cytoplasm and nucleus, and the normal epithelial cells were present in the cytoplasm and nucleus. TCF/lef dependent transcription activity was measured in colorectal cancer-derived cell lines 20-50 times higher than in normal epithelial cells. The results showed that TCF/lef dependent transcription activity was associated with the progression of colorectal cancer in normal epithelial cells. The normal APC quality was maintained in 293 cells, and the TCF/lef dependent transcription activity was increased when the Wnt3a gene was introduced. Now the system is used, Wnt is used, APC is used The aim of this study is to analyze the molecular identity of yeast by using the two hybrid method. The result is that frizzled5 and frizzled8 particles interact with each other, and the new particle fzip is identical. The PDZ domain and coiled-coil motif of the fzip file have 455 bits of acid, and the PDZ domain and coiled-coil motif have 455 bits of acid, and the PDZ domain and coiled-coil motif have 455 bits of acid.